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《阴沟肠杆菌uw4菌株acc脱氨酶基因的克隆、序列分析及原核表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2006,14(6):952~956·研究论文·阴沟肠杆菌UW4菌株ACC脱氨酶基因的克隆、序列分析及原核表达*黄海泉1,22111,黄美娟,丁小维,梁雪泥,刘飞虎**(1.云南大学生命科学学院，昆明650091；2.西南林学院园林学院，昆明650224)摘要：从阴沟肠杆菌()UW4菌株提取细菌总DNA，根据已报道的阴沟肠杆菌ACC脱氨酶(1-aminocy-clopropane-1-carboxylicaciddeaminase
2、)基因序列设计简并引物，通过PCR扩增获得1条约1.02kb特异片段，把该片段连接到pGEM-Tvector上进行测序。序列分析结果表明，该基因编码区全长为1017bp，共编码338个氨基酸残基，与报道的序列相比仅存在8个核苷酸的差异，同源性达99.1%；将其翻译成氨基酸序列后发现，仅引起了4个氨基酸残基的变化，氨基酸同源性为98.2%。利用DNASIS软件对蛋白质二级结构进行分析比较，发现其蛋白质二级结构及其单元与报道的序列完全一致。将其插入原核表达载体pET-28b进行诱导表达，发现其表达蛋白在分子量约39k
3、D处比对照多出一明显条带；经Westernblot分析检测，发现此带即为His-ACDS融合蛋白。关键词：阴沟肠杆菌；UW4菌株；ACC脱氨酶；基因克隆；原核表达中图分类号:S184S188文献标识码:A文章编号:1006-1304(2006)06-0952-05Cloning,SequenceAnalysisandProkaryoticExpressionofACCDeaminaseGenefromUW4Strain1,22111HUANGHai-quan,HUANGMei-juan,DINGXiao-wei,
4、LIANGXue-ni,LIUFei-hu**APCRproductof1.02kbwasobtainedfromthetotalDNAofUW4strain,usingoligonucleotideprimersdesignedbasedonthereportedsequenceof1-aminocyclopropane-1-carboxylicaciddeaminasegeneofTheproductwasligatedtopGEM-Tvectorandsequenced.Lengthofthecodingr
5、egionwas1017bpandencoded338aminoacidresidues.Therewereonlyeightnucleotideacidsthatweredifferentfromthereportedsequence,andresultedinchangeoffouraminoacidresidues,showing99.1%ofidentityinnucleotideacidsand98.2%ofidentityinaminoacids.BasedontheanalysisofusingDN
6、Asis,theclonedsequencehadsecondarystructureandstructureunitsofproteinwerecompletelysameasthatofthereportedse-quence.Inaddition,prokaryoticexpressionvectorwasconstructedbyinsertingtheclonedfragmentintopET-28bandinducedbyIPTG,westernblotresultshowedthatthesizeo
7、ffusionproteinexpressedinthisstudycoincidedwiththatofforegoneconclusion.TheseresultsimpliedaputativefunctionofthenewlyclonedsequenceidenticaltothatofthereportedgenesequenceofACCdeami-nase.;UW4strain;ACCdeaminase;genecloning;prokaryoticexpression在基因水平上调控花衰老和果实
8、成熟的主要途分解成琢-丁酮酸和氨抑制乙烯的生成。Campbell径有两条：调节乙烯受体降低乙烯敏感性和抑制乙和Thomson(1996)、Jia.(2000)及Ma.(2003)烯的生物合成。Admas和Yang(1979)发现1-氨基分别从sp.、及环丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylate,中分离克隆了ACC脱氨酶基因，至AC
