ages%2frage信号启动糖尿病粥样斑块钙化机制

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1、中文摘要AGEs／RAGE信号启动糖尿病粥样斑块钙化的机制东南大学医学院博士研究生王中群博士生导师刘乃丰教授摘要背景和目的：血管钙化是糖尿病、动脉粥样硬化、慢性肾病等多种病理状态‘卜．，由于高钙磷环境以及局部或全身矿化诱导子上调、抑制子缺失所导致的骨特异性羟基磷灰石结品[Cal0(OH)2(P04)6]在成骨样细胞介导下主动沉积在血管壁的病理过程。在这一过程中，血管壁矿化防御机制被耗竭，平滑肌细胞等间叶细胞丢失原有表型而获得成骨表型，是多种病理性钙化发生的关键所在。故此，寻获启动血管壁平滑肌细胞发生表型转化的钙化级联信号及其传递路径一直是钙化研究领域的

2、关注焦点。最新资料显示，我国现有9240万糖尿病患者和14820万糖尿病前期患者，已超越印度成为世界第一大糖尿病国家。每年因糖尿病及其并发症而造成的直接经济损失高达260亿美元，占全国医疗费川总支出的18．2％。在糖尿病致夕匕致残的重要并发症中，加速性动脉粥样硬化以其发生时间早、进展速度快、累及范同J’．、治疗预后筹等特征而倍受医学界重视。基础实验与临床调查证实，动脉粥样硬化病理状态‘卜．人中动脉(尤其是冠状动脉)的内膜钙化，由于钙盐在斑块内异常沉积导致血管壁机械性质改变，是造成急性心肌梗夕匕、充血性心力衰竭、血管撕裂、动脉夹层、肢体缺血性坏疯以及经皮

3、冠脉介入术大败的重要原因。鉴丁动脉粥样硬化内膜钙化的重要临床意义和糖尿病患病率迅猛增加所带米的社会负担，深入研究糖尿病动脉粥样硬化内膜钙化的启动机制，进而有针对性地进行约物干预已经尤为迫切。本课题组多年的研究结果及国内外相关研究均证实，持久的高血糖状态可导致糖尿病患者体内许多结构和功能蛋白、脂质甚至核酸发生糖基化，经过一系列非酶促反应最终形成具有高度活性、结构多样的糖基化终产物(advancedglycationend．products，AGEs)。后者通过与细胞表面特异性AGEs受体(receptorforAGEs，RAGE)相互作川而发挥一系列的血

4、管病理作．I{j，加速糖尿病性动脉粥样硬化及晚期血管钙化的发生发展。但时至今日，有关AGEs与血管钙化关系的研究仍然只是局限丁一FY,J两个方面：单纯的对人群现象的观察利钙化细胞模型的研究。AGEs在糖尿病动脉粥样硬化钙化发生发展及演进过程中究竟发挥了什么样的作用还有待相关研究的深入。另有研究显示，凋亡泡沫细胞及其继发性坏死产生的坏夕匕碎片不仅可为血管壁平滑肌细胞提供丰富的钙磷米源，而且还可提供钙化的成核微环境。有鉴丁．此，在本研究中我们借助糖尿病apoE一小鼠动脉粥样硬化钙化模型和高脂凋亡共存环境主动脉平滑肌细胞钙化模型两个平台米观察AGEs的主要免

5、疫原一1卜交联。11：荧光性羧甲基赖氨酸CML对动脉粥样硬化钙化进展的影响及相关机制，以期拓展靶向机制的治疗策略。东南大学博二I：学位论文方法：本研究分三部分实验：1．在体研究6周龄apoE斗小鼠给予腹腔注射链脲佐菌素(stmptozocin，STZ)40mg／kg／day，连续5天。2周后血糖水平>300mg／IdL的小鼠纳入本研究，并由普通饮食转为半合成型高脂饮食(high．fatdiet，HFD)(21％脂肪，0．15％胆同醇，其他成分同普通饮食)，同时给予尾静脉注射CML10mg／kg／day，连续四个月。在转换高脂饮食和给予CML注射后的0个

6、月(groupOM，n=lO)、2个上J(group2M，n=lO)平ll四个月(group4M，n=lO)时对小鼠实施安乐死，并进行相关检测与分析。2．巨噬细胞凋亡研究①高脂环境下巨噬细胞分别荷载不同浓度CML48h。选择能诱导泡洙化和凋亡的最佳浓度。@CML对内质网应激相关指标影响的观察，分为四组：对照组，50I．tg／mLoxLDL处理组，10p．mol／LCML处理组，oxLDLCML联合处理组。③观察何种信号通路介导CML诱导的内质网应激性凋亡，分为七组：对照组，oxLDL处理组，oxLDLCML联合处理组，anti．RAGE处理组，anti

7、—CHOP处理组，Z．ATAD—FMK处理组，SP600125处理组。3．主动脉平滑肌细胞钙化研究①观察高脂与凋亡共存环境下不同浓度梯度CML对A7r5主动脉平滑肌细胞钙盐沉积的影响。②观察高脂与凋亡共存环境～t-CML对A7r5主动脉平滑肌细胞成骨表型的影响。③观察高脂与凋亡共存环境下CML经过何种信号途径传递钙化级联反应，分为人组：对照组，CML处理组，anti．RAGE处理组，DPI处理组，SB203580处理组，anti．cbfal处理组。④对比CML与高糖在凋亡高脂共存环境中对钙化表型的影响。针对上述实验的观察内容，分别进行HE染色、免疫组织

8、化学染色、免疫细胞化学染色、yonKossa染色、Masson染色、钙含量检测、ALP活性检测