sptoll1和sptoll2调控拟穴青蟹抗菌肽的表达

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1、硕士学位论文题目SpToll1和SpToll2调控拟穴青蟹抗菌肽的表达SpToll1andSpToll2modulatetheexpressionof英文题目antimicrobialpeptidesinScyllaparamamosain姓名陈燕学号11508051所在学院理学院导师姓名李升康教授专业海洋生物学入学日期2015年9月答辩日期2018年6月论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本

2、人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。本论文属于：保密（），在年解密后适用本授权声明。不保密（）。（请在以上括号内打“√”）作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学硕士学位论文SpToll1andSpToll2调

3、控拟穴青蟹抗菌肽的表达SpToll1andSpToll2modulatetheexpressionofantimicrobialpeptidesinScyllaparamamosain学位申请人：陈燕导师：李升康（教授，博导）专业：海洋生物学答辩委员会主席：答辩委员会委员：汕头大学海洋生物研究所中国，汕头，515063摘要摘要拟穴青蟹（Scyllaparamamosain）是我国东南沿海重要的海洋经济养殖蟹。而Toll样受体（Toll-likereceptor，TLRs）则是在甲壳动物中广泛存在的一种重要的模式识别受体，在天然免疫过程中起着识别病原物并触发机体产生免疫反应的作

4、用。目前，拟穴青蟹中已经报道了一种SpToll，但人们对拟穴青蟹体内的Toll样受体参与的信号通路及其承担的生物学功能还知之甚少。因此，深入研究拟穴青蟹Toll参与的信号通路具有重要的科学意义。本论文取得的主要结果如下：论文研究了拟穴青蟹另外一种新型Toll样受体（SpToll2）的克隆、其与SpToll1应激表达分析。SpToll2的cDNA全长为3391bp，开放阅读框（openreadingframe，ORF）为2646bp，编码881个氨基酸。SpToll2蛋白结构预测结果显示：含有6个胞外亮氨酸富集结构域（Extracellularleucine-richrepea

5、t，LRR），一个跨膜结构域（Transmembranedomain，TM）以及一个胞内TIR结构域（IntracellularToll/IL-1receptor，TIR）。系统进化树分析结果表明SpToll2与果蝇DmToll1聚为一簇，且与三疣梭子蟹PtToll4同源性最高，达到82%。组织特异性表达结果显示：SpToll2在所有检测组织中都有表达，其在血淋巴和肝胰腺中表达量最高，而在心脏和肌肉中最低。免疫应激表达结果显示：在副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus，金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus，聚肌胞苷酸Polyinosinic:

6、polycytidylicacid（PolyI:C）和白斑综合征病毒whitespotsyndromeviru（sWSSV）胁迫下，SpToll1和SpToll2在血淋巴和肝胰腺中都能被诱导形成不同程度的表达。以上结果表明：SpToll1和SpToll2是拟穴青蟹体内潜在的免疫因子并在青蟹抵抗病原菌感染中起重要的免疫防御作用。为深入研究11种抗菌肽在青蟹体内表达的信号通路，我们利用RNA干扰技术和过表达实验，研究两种Toll样受体干扰并在病原刺激情况下各抗菌肽的表达规律。实验结果表明，SpToll1和SpToll2能不同程度地调控拟穴青蟹中抗菌肽以及4种下游免疫相关基因（Sp

7、MyD88，SpTube，SpPelle和SpTRAF6）的表达。当沉默SpToll1后，青蟹血淋巴中SpHistin,SpALF1与SpALF5的表达明显受到抑制，然而当沉默SpToll2后，SpALF1-6,SpGRP,SpArasin以及SpHyastastin的表达显著被抑制。另外，在细菌结合实验中，SpToll1-LRR和SpToll2-LRR胞外I摘要重组蛋白对4种病原菌（副溶血弧菌V.parahaemolyticus，金黄色葡萄球菌S.aureus，大肠杆菌Escherichiacoli和