松口蘑人工菌塘诱导形成的初步研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com菌物学报24(2)：267~276，2005Mycosystema松口蘑人工菌塘诱导形成的初步研究伦志明李玉花邢树堂傅禄敏f东北林业大学花卉生物工程研究所哈尔滨15o04o)摘要：本研究通过土壤筛选找到适合松口蘑菌丝体生长的土壤，并在其土壤中添加适当浓度的橄榄油(0．5％．2．0％)，有效地促进了菌丝体在土壤中的生长，菌丝生长状况酷似野外的松口蘑菌塘，且随着添加浓度的增加，菌丝体生物量呈明显的正相关。当土壤中橄榄油浓度为0．5和1．0％时，松口蘑共生植物赤松苗的生长不但没有受到抑制，而且还能与菌丝体在这种“菌塘

2、”中形成菌根。本研究成功地建立了中国松口蘑人工菌塘诱导体系，同时也为其人工子实体的诱导研究提供了必要的前提条件。关键词：土壤筛选，橄榄油，菌丝体生物量中图分类号：Q939．5文献标识码：A文章编号：1672．6472(2005)02．0267．02761引言松口蘑Tricholomamatsutake(S．ItoetImai)Singer是世界上最名贵的菌根型食用菌之一。关于松口蘑的人工栽培研究已经进行了近一个世纪之久，但是迄今为止，除了形成几个子实体原基(Ogawa&Hamada，1975)外，尚没有栽培成功的例子。近年来，关于无菌条件下松口蘑人工菌根苗诱

3、导成功的报导有很多(Yamadaeta1．，1999a；Guefin．Laguetteeta1．，2000a；Vaarioeta1．，2000)，他们也进行了人工菌根苗野外栽培研究，然而，尽管大多数菌根真菌在侵染宿主植物根部后都能够进行扩展生长(Read，1991；Guerin．Laguetteeta1．，200Ob；Wueta1．，2001)，可松口蘑菌丝体即便是其在宿主植物根内形成哈蒂氏网后仍很难在菌根周围形成大量菌丝体，移栽后的菌根苗会出现菌丝生长退化现象，并且有的菌根也仅能存活4个月左右(Yamadaeta1．，2001)。这种有限生长的外延菌丝根本

4、无法形成天然条件下松口蘑子实体形成的关键场所一菌塘，因而也就无法继续进行子实体的诱导实验。菌塘是由密生的白色或灰白色菌丝体与植物根系及土壤颗粒相互交错纽结而成的团状结构(Ogawa，1975a；Hosfordeta1．，1997；Yamadaeta1．，1999b)。这里既是松口蘑菌丝体与宿主植物共生并进行营养交换的场所，也是其进行核配与分化并形成子实体原基的地方，因此菌塘是松口蘑完成其整个生活史不可缺少的场所(弓明钦等，2002)。Ogawa(1975a)在观察野外松口蘑菌塘的扩展生长时发现，为了维持菌落的进一步生长发育，与宿主植物相连的菌丝体需要有一个临

5、界生物量。由此可见，人工菌根苗形成后菌丝体在基质中能否顺利生长扩展形成可以满足子实体发生的菌塘，对于松口蘑人工栽培的成功与否是十分关键的问题。Unestam＆Sun(1995)认为，脂类能够促进疏水性外生菌根菌丝体的生长。Guefin．Laguette等(2003)也发现界面活性剂和橄榄油对于松口蘑菌丝体的生长具有促进作用，这一发现对于’通讯作者收原稿日期：2004．09．22，收修改稿日期：2004．12．01维普资讯http://www.cqvip.com268菌物学报24卷松12：1蘑人工菌塘的诱导有着很大的启发性。本实验的目的就是以自然土壤为介质，通

6、过添加自然物质一植物油，诱导并促进菌丝生长，从而建立一种诱导松12：1蘑人工菌塘形成的有效方法。本研究为松12：1蘑人工菌根合成体系建立后菌丝无法扩展生长的问题提供了解决办法，同时也为松口蘑人工子实体诱导研究进一步提供了一个必要条件。2材料与方法2．1供试菌株来源与培养本实验中采用了W2，W3，F1，F2，F4，A和T945等7个菌株，其中W2和W3分离自2000年8月采集于吉林省汪清县赤松林下的松口蘑子实体(北纬43。2331”，东经130。157”，海拔650m)，F1，F2和F4分离自同时问采集于吉林省富裕镇赤松林下的松口蘑子实体(北纬42~27，45

7、”，东经129~3414”，海拔500m)，A由延边大学园艺系教授傅伟杰先生提供，T945由日本东京大学铃木和夫教授提供。母株用Ohta(1990)琼脂(1．4％)培养基在人工气候箱(23~2。C)中进行暗培养，每两个月继代培养一次。2．2供试植物赤松苗的培养赤松种子由东北林业大学林学院沈海龙教授提供(采集于吉林龙井，1999)，装于信封内贮存在4。C冰箱中备用。种子发芽及幼苗培养方法见Vaario等(2000)，不同之处在于：发芽用培养基的葡萄糖含量为5g／l；幼苗培养基为RM(Vaarioeta1．，2002)，葡萄糖为101。2．3培养土的筛选用于接种

8、T945菌株的土壤有4种：栽培土(市售，pH=7．0