基于焦亡相关蛋白GSDMD介导的新型沙门氏菌菌蜕的制备与免疫效力评价

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1、分类号：S855.1单位代码：10193密级：公开学号：20150519硕士学位论文基于焦亡相关蛋白GSDMD介导的新型沙门氏菌菌蜕的制备与免疫效力评价PreparationandImmuneEfficacyEvaluationofNovelSalmonellaGhostBasedonpyroptosisProteinGSDMD作者姓名：王曼宇学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物微生物与免疫学指导教师：刘思国研究员所在学院：动物科学与技术学院2018年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别

2、加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借

3、阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人(同意/不同意，务必打印后填写)吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版(涉密学位论文解密后应遵守此协议)。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日导师签名：签字日期：年月日摘要沙门氏菌病（salmonellosis）是各种动物由沙门氏菌属细菌引起的疾病的总称。临床表现为败血症和肠炎，可导致怀孕母畜流产，也可导致人食物中毒和急性胃肠炎。肠炎沙门氏菌(Salmone

4、llaenteritidis)是引起人类食源性疾病的主要革兰阴性菌之一，引起家禽发病死亡，造成严重的经济损失，并且被肠炎沙门氏菌污染的畜禽产品严重危害人类健康,已成为公共卫生的所关注的问题。因此研制一种有效的疫苗控制本病，是科研人员所面临的重要任务。本试验构建出基于焦亡相关蛋白基因介导的新型菌蜕的溶菌质粒，然后在大肠杆菌DH5α中测定溶解率，达到99.99％以上，可用于肠炎沙门氏菌菌蜕的制备。采用电击穿孔法将溶菌质粒转入肠炎沙门氏菌中，在阿拉伯糖诱导下使其裂解，制成沙门氏菌菌影疫苗。用制备的沙门氏菌菌蜕疫苗小鼠进行免疫。将100只6-8周龄的小鼠，随机分为5组，即为灭活苗组、

5、灭活苗+佐剂组、菌蜕组、新型菌蜕组和对照组，共免疫3次。免疫后眼部采血分离血清，以沙门氏菌超声上清为包被抗原，用间接ELISA方法检测血清中IgG水平。刺激分离免疫小鼠脾细胞，刺激物为肠炎沙门氏菌脂多糖（LPS），试剂盒检测细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌情况，++并用流式细胞仪检测CD4及CD8细胞亚群动态变化。三免后7天用SM6进行攻毒。攻毒1周后，观察临床症状、存活动物数及病理组织学研究，评价免疫保护效果。试验结果表明，随着免疫次数的增加，各试验组血清特异性抗体水平逐渐升高，对照组与实验组差异极显著（P<0.001），新型菌蜕组与灭活苗组差异极显著（P<0.

6、001），与灭活苗+佐剂、菌蜕组差异不显著（P>0.05）。细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的检测结果显示，与对照组相比，各实验组IL-2、IL-4和IFN-γ的++细胞因子水平也呈上升趋势，能引起较强的细胞免疫。CD4及CD8亚群的动态变化表明疫苗组可诱导淋巴细胞的增殖，各实验组与对照组差异极显著（P<0.001），新型菌蜕组与灭活苗组差异极显著（P<0.001），与灭活苗+佐剂、菌蜕组差异不显著（P>0.05）。从攻毒后保护效果来看，各试验组高于对照组，新菌蜕组与菌蜕组保护率相同为100%，灭活苗组保护率为30%，灭活苗+佐剂保护率为70%，攻毒后无明显发病症状。结

7、果表明新沙门氏菌菌蜕疫苗能够诱导较高的细胞免疫和体液免疫，对沙门氏菌的攻击起到了很好的保护作用，本研究I结果为肠炎沙门氏菌新型疫苗的研制提供了基础。关键词：肠炎沙门氏菌；菌蜕；免疫应答；保护效力IIAbstractSalmonellosisisacontagiousdiseasecausedbySalmonellainvariousanimals,whichleadtocancausesepsis,enteritis,canleadtopregnancymaternalabortion,foodpois