猪源沙门氏菌菌蜕的制备及其免疫原性的研究

《猪源沙门氏菌菌蜕的制备及其免疫原性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：S855.1单位代码：10193密级：公开学号：2012645硕士学位论文猪源沙门氏菌菌蜕的制备及其免疫原性的研究GenerationandImmunogenicityofSwineSalmonellaGhostVaccine作者姓名：陈龙学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物微生物及免疫学指导教师：钱爱东教授所在学院：动物科学技术学院2015年5月本研究由“吉林省农业产业技术体系项目（201324）”资助FundedbytheAgriculturalTechnologySystem

2、ofJilinProvince(No.201324)独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声

3、明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及

4、相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病病原之一，对牲畜的繁殖和幼畜的健康带来严重威胁，临床上多表现为败血症和肠炎，也可使怀孕母畜发生流产，猪源沙门氏菌一直是危害养猪业发展和动物食品卫生上的重要病原体。细菌菌蜕是指缺少细胞浆、核酸、死的细菌菌体，它是经生理生化方法裂解后形成的完整细菌空壳，其内容物在裂解过程流失，因此具有良好的安全性，且制备和贮存方法简便，可以用来制备多价联合疫

5、苗。与传统使用的变性灭活疫苗相比，菌蜕疫苗没有免疫原性的改变，具有佐剂的性质，且能够载入外源抗原、DNA疫苗、药物等物质，因此是一种优化的候选灭活型疫苗。通过生理生化特性、16SrDNA序列分析、种属特异性PCR鉴定等方法证明实验室保存的细菌为沙门氏菌，通过小鼠半数致死量和药敏试验，筛选毒性强且无耐氨苄抗性的沙门氏菌，为后续实验奠定基础。本实验室构建了温控裂解质粒PBVE220，将其导入沙门氏菌感受态细胞中，筛选得到质粒型猪源沙门氏菌菌蜕。对质粒型猪源沙门氏菌菌蜕进行溶菌动力学试验分析，经优化后的诱导条件

6、，将质粒型猪源沙门氏菌菌蜕培养至OD600值约为0.4时，诱导6h后，得到裂解率为99.46%的沙门氏菌菌蜕，菌蜕数约为7.3×107个/mL，扫描电镜观察菌蜕表面结构完整，可见有内容物由溶菌孔道排出。最后，对质粒型猪源沙门氏菌菌蜕、沙门氏菌灭活苗、沙门氏菌灭活佐剂苗免疫原性比较分析，沙门氏菌菌蜕免疫小鼠后，随着免疫次数的增加，各免疫组血清IgG含量升高，且菌蜕BG组血清IgG含量明显高于灭活组和灭佐组，说明菌蜕疫苗能有效地刺激特异性体液免疫，小鼠脾淋巴细胞亚群检测分析表明质粒型猪源沙门氏菌菌蜕能诱导机体

7、产生Th1型细胞免疫应答，菌蜕BG组细胞因子检测结果显示IFN-γ和IL-12分泌水平明显升高，且显著高于对照组，但IL-4分泌水平与对照组相比差异不显著，说明菌蜕BG组能诱导以Th1型细胞为主的保护性免疫应答。免疫保护效果说明，菌蜕BG组提供的保护率可达70%，且小鼠攻毒后各组织病理学变化可见，菌蜕组的临床症状轻于其他免疫组。综上所述，质粒型猪源沙门氏菌菌蜕能提供较好的安全性和免疫原性，为新型疫苗的研究提供依据，具有广阔的应用前景。关键词：沙门氏菌；菌蜕；免疫原性IAbstractSalmonellai

8、soneoftheimportantzoonoticpathogen,whichhasseriousthreattothebreedingoflivestockandhealthofyounganimals.itcancauseSepticemia,Enteritisandabortion.Salmonellaareimportantpathogensinpigindustryandanimalfoodhealth.Bacte