叶酸与dnkmt1对fhit基因在宫颈癌细胞中表达的影响

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1、山西医科大学硕士学位论文分类号：R183密级：单位代码：10114学号：201010075叶酸与DNMT1对F⋯T基因在宫颈癌细胞中表达的影响研究生：白兰指导教师：王金桃教授申请学位门类级别：医学硕士专业名称：流行病与卫生统计学研究方向：肿瘤流行病学所在学院：公共卫生学院二。一三年五月十日山西医科大学硕士学位论文学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用

2、于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：刍兰学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借

3、阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：鱼兰．日期：墨丝年—窆月盈日指导教师签名：二fff艺笙IVI*匠,．w同期：哩乒年—[月』；日(本声明的版权!J!]山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)山西医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯IAbstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1I‘中英文缩写对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．X前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．211．叶酸对宫颈癌细胞生长及DNMTl、FHIT基因表达的影响⋯212．DNMTl对宫颈癌细胞生长及FHIT基因表达的影响⋯⋯⋯293．叶酸、DNMTl对宫颈癌细胞生长及FHIT基因表

5、达的影响⋯37讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49一、叶酸对宫颈癌细胞生长及DNMTl、FHIT基因表达的影响．49二、DNMTl对宫颈癌细胞生长及FHIT基因表达的影响⋯⋯．50三、叶酸、DNMTl对宫颈癌细胞生长及FHIT基因表达的影响．51四、叶酸、DNMTl对Caski细胞HPVl6E6、E7表达的影响⋯．53参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．55综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．72个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．73山西医科大学硕士

6、学位论文叶酸与DNMTl对F⋯T基因在宫颈癌细胞中表达的影响中文摘要目的：宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤，流行病学和实验研究均表明，高危型人乳头瘤病毒(HR—HPV)的持续感染是导致宫颈癌发生的原因之一，但不是唯一因素。叶酸参与DNA的合成和DNA甲基化，其在宫颈癌中的作用日益受到关注。DNA甲基化是目前研究最为广泛的表观遗传学事件，而DNMTl作为这一过程中的关键酶，已被证实与多种肿瘤的发生有关。脆性组氨酸三联基因(FragileHistidineTriadgene，FHIT)是目前宫颈癌研究中报道最多的抑癌基因之一

7、。其5’端CpG岛的超甲基化可能是其失活的主要机制。已有研究报道，叶酸可影响DNMTl的活性；且补充叶酸可使FHIT蛋白表达升高，但叶酸是否通过DNA甲基化过程而影响宫颈癌细胞中FHIT基因的表达，目前未见相关报道。本次实验将采用体外研究方法对其加以探讨。方法：运用瞬时转染技术将重组质粒和空质粒导入宫颈癌C33A和Caski细胞中，设立未转染组作为对照，分别向未转染组、空质粒组和重组组中添加不同浓度叶酸，采用细胞计数检测宫颈癌细胞的生长情况，流式细胞仪分析细胞的增殖及凋亡情况，Real—timePCR检测DNMTl

8、、FHIT及HPVl6癌基因E6、E7mRNA的表达情况，Western—blot法检测DNMTl和FHIT蛋白表达情况。结果：1．叶酸对宫颈癌细胞生长及DNMTl、FHIT基因表达的影响：(1)随着叶酸浓度的增加抑制率呈上升趋势(C33A：r=O．976，P