叶酸、dnmt1对宫颈癌细胞生长的影响及与hpv16的关系

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1、分类号：R183密级：单位代码：10114学号：200910195叶酸、DNMTl对宫颈癌细胞生长的影响及与HPVl6的关系研究生：董倩指导教师：王金桃教授申请学位门类级别：医学硕士专业名称：流行病与卫生统计学研究一方向：肿瘤流行病学所在学院：公共卫生学院2012年5月13同学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均己做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究

2、所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：j豳匮—一日期：j鱼眨一年—L月j乒同学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位

3、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：指导教师签名：FI期：趁f2年—蔓同期：掣￡2年』同R(本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

4、．．．．．．．．．．1V中英文缩写词对照表⋯⋯．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一．．VlI前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯。．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯。．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯32．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．132．1重组质粒的鉴定⋯．⋯．．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．132．2叶酸对宫颈癌C33A细胞和Caski细胞生长的影响⋯⋯⋯⋯⋯．152．3DNMTl对宫颈癌细胞生长的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．212．4叶酸、DNMTl对宫颈癌

5、细胞生长的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．263．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯344．结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．40综述⋯．．．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49叶酸、DNMTl对宫颈癌细胞生长的影响及与HPVl6的关系中文摘要目的流行病学研究显示：宫颈癌发病与HPV感染有关，但HPV感染并非宫颈癌发生的唯一因素。叶酸缺乏可增加宫颈癌的发生风险

6、。叶酸作为一碳单位的载体，参与DNA的甲基化。近年来，已发现DNA甲基化与人类多种肿瘤的发生有关，DNMTl(DNA甲基转移酶1)作为甲基化的关键酶在肿瘤的发生过程中起重要作用。研究发现宫颈癌细胞中DNMTl存在异常高表达，抑制DNMTl可逆转宫颈癌的恶性表型。那么叶酸是否通过对DNA甲基化的影响而在宫颈癌的发展过程中起作用，以及这一过程是否与HPV有关，目前相关研究甚少。在本课题组前期人群研究发现叶酸缺乏、DNMTl表达异常和宫颈癌的发生有关的基础上，本次以HPV阴性C33A和HPVl6阳性Caski细胞作为研究对象，通过叶酸干

7、预、RNA干扰的方法验证叶酸、DNMTI对宫颈癌细胞生长的影响以及与HPVl6的关系，分析叶酸、DNMTI在宫颈癌变发生中的相互作用。方法运用瞬时转染技术将重组质粒和空质粒导入宫颈癌细胞C33A和CaskJ中，设立未转染组作为对照，在干扰与不干扰情况下，添加不同浓度叶酸，以MTT法检测宫颈癌细胞的活性，流式细胞仪分析细胞的增殖及凋亡情况，采用RT-PCR检测DNMTl、HPVl6癌基因E6、E7mRNA的表达情况，westernblotting检测DNMT!蛋白表达情况。结果．1、重组质粒的鉴定：重组质粒和空质粒经酶切鉴定后，获得

8、291bp和290bp两条重组片段。重组质粒和空质粒成功转染宫颈癌细胞C33A和Caski，获得65％和63％的转染率以及53％和52％的DNMTl基因抑制率。2、叶酸对宫颈癌细胞生长的影响：(1)叶酸对宫颈癌细胞C33A和Caski的活性具有抑制