保加利亚乳酸杆菌分解尿毒素的定向诱变

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1、中图分类号UDCR692．5610硕士学位论文学校代码密级10533保加利亚乳酸杆菌分解尿毒素的定向诱变Lactobacillusbulgaricus’decomposingofuremic●-一-一toxinsbydirectivemutation作者姓名：白运焕学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：临床医学内科学湘雅二医院蒋云生教授论文答辩日期翌＆：兰童兰答辩委员会主中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表

2、或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：鱼立照日期：—丝堕年．￡月绺日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：丝[!年蝴Z细硕士学位

3、论文中文摘要保加利亚乳酸杆菌分解尿毒素的定向诱变中文摘要目的：利用先诱导后诱变的方法，筛选出具有高效分解多种尿毒素，并且能稳定遗传的乳酸菌，为慢性肾衰的肠道细菌疗法提供新菌种。方法：1．将原始保加利亚乳酸杆菌菌液置于尿毒症病人血清中反应24小时后，取上层血清测定其对肌酐基础降解能力。2．原始保加利亚乳酸杆菌株的定向诱导：将原始菌株接种于尿毒症病人血清中培养传代，每隔5代检测血清中肌酐浓度，直到出现能降解肌酐的菌株，为阳性菌株。3．最佳诱变剂的选定：测出原始保加利亚乳酸菌的生长曲线一>确定生长对数期一>确定紫外线及硫酸二乙酯的作用时间一>制备悬菌液一>紫外线诱

4、变、硫酸二乙酯诱变、硫酸二乙酯．紫外线复合诱变处理一>稀释后涂布筛选平板培养一>挑取生长良好的菌株置入尿毒症病人血清中反应一>选择能使肌酐浓度下降幅度最大的菌株进行下一轮的诱变，依次类推进行三轮诱变一>经过三轮诱变后，选出降解肌酐强的菌株进行复筛并进行遗传稳定性研究一>确定能使菌株降解肌酐能力提高幅度最大的诱变剂。4．诱导后的保加利亚乳酸杆菌株的诱变：诱导后的阳性菌株制成菌悬液，运用最佳诱变剂进行三轮诱变，经过初筛和复筛，筛选出降解肌酐能力最强的菌株，并进行遗传稳定性研究。5．降解尿毒素的研究：诱导结合诱变选出的阳性菌制成菌悬液置中文摘要于尿毒症病人血清中，

5、以不含菌液尿毒症病人血清、原始菌株，诱导菌株，单独诱变选出的肌酐分解率最高的菌株为对照组，反应24小时后取上层血清测定其降解肌酐、尿素氮、尿酸、血磷、甲状旁腺素、同型半胱氨酸的情况。结果：1．原始保加利亚乳酸杆菌接种入尿毒症病人血清中，作用24小时后，作用前后肌酐的浓度没有明显变化(P>D．05)。2．原始保加利亚乳酸杆菌在尿毒症病人血清中传代20次后，稀释后在尿毒症病人血清反应24小时后，血清中肌酐浓度与空白对照组、原始菌株相比明显下降(P

6、明复合诱变效果最佳j一最后筛选出DU3．12，肌酐分解率比原始菌株提高了9．86％的工程菌。4．经过诱导和诱变处理的保DilrbO亚乳酸杆菌，通过初筛和复筛，筛选出对肌酐降解能力明显提高的菌株DUC3．17，其肌酐分解率达17．23％，比诱导后菌株提高了11．90％，比原始菌株提高了16．19％。5．在尿毒症病人血清中连续传代5次后，DU3。12、DUC3．17仍能显著地降低血清中肌酐的浓度，遗传稳定性较好。6．将菌悬液置于尿毒症病人血清中反应24小时后，与空白对照组比较，原始保加利亚乳酸杆菌组肌酐、尿素氮、尿酸、血磷、甲状旁腺素、同型半胱氨酸的浓度没有明显

7、变化(P>D．∞)；诱导菌株组肌酐、尿素氮、尿酸的浓度明显变化(尸D．∞)；Du3．12组肌酐、尿素氮、硕士学位论文中文摘要尿酸、血磷、甲状旁腺素的浓度明显下降(PD．D5)；DUC3．17与所有对照组比较，肌酐、尿素氮、尿酸、血磷、甲状旁腺素的浓度有明显变化(尸p．05)。DUC3．17肌酐、尿素氮、尿酸、血磷、甲状旁腺素、同型半胱氨酸的分解率分别比是17．23％，36．02％，

8、9．84％，15．73％，78．26％，12．69％