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时间:2019-03-08
《gdnf在胰腺癌神经侵袭中作用和阻断效果的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的:(1)构建人胰腺癌细胞系MIAPaca一2/DRGs的共培养模型,为胰腺癌神经侵袭的研究提供新的可量化的体外模型。(2)观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在胰腺癌细胞神经侵袭中的作用及阻断效果,探讨其诱导神经侵袭的可能的作用机制。方法:(1)培养人胰腺癌细胞系M认Paca.2细胞并通过RT-PCR方法检测RET基因的表达,制备大鼠背根神经节(DRGs)并通过RT-PCR方法检测GDNF基因的表达,将MIAPaca.2细胞与大鼠DRGs培养于同一培养皿中,建立MIAPaca.2/DRGs体外共培养模型,观察胰腺癌
2、细胞与DRGs神经突的生长情况及相互影响,观察胰腺癌细胞神经侵袭的动态过程。(2)MTT方法分别检测促分裂原活化蛋白激酶通道(MAPK)阻断剂PD98059和磷脂酰肌醇3激酶通道(P13K)阻断剂LY294002在不同浓度、不同作用时间条件下对胰腺癌细胞MIAPaca-2存活率的影响,利用Trans.well装置在boyden小室的下室中分别加入不同的细胞因子(GDNF、GDNF抗体、PD98059、LY294002),通过计数各组跨膜细胞的数量并进行统计学分析,检测GDNF对胰腺癌细胞的趋化作用和PD98059、LY294002的阻断效果。结果:(1)
3、RT-PCR方法检测MIAPaca.2与DRGs中分别有RET及GDNF基因的表达。在MIAPaca.2/DRGs共培养体系中,胰腺癌细胞比单独培养者形成更多的细胞集落,神经节周围则出现更多的神经突生长,胰腺癌细胞与神经突出现互相吸引的趋化性生长,胰腺癌细胞向神经节方向发生迁移,并沿着神经节周围生长最终包绕神经节。(2)MTT实验中,培养基中分别加入不同浓度的PD98058或LY294002后,在不同作用时间下胰腺癌细胞形态未发生明显改变,各组的细胞存活率并没有显著差异,总体水平大都维持在90%~100%之间,且随药物作用时间或药物浓度变化均无明显规律性
4、变化。Trans—well实验中,下室中加入GDNF后增加了Boyden小室跨膜细胞数量,加入阻断剂PD98059后跨膜细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P=0.014),加入阻断剂LY294002后跨膜细胞数量明显减少,差异无统计学意义(P=0.221),加入两种阻断剂后跨膜细胞数量最少,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:(1)成功构建了人胰腺癌细胞系MIAPaca.2/DRGs的共培养模型,胰腺癌神经侵袭是神经细胞与胰腺癌细胞的相互作用的结果,为胰腺癌神经侵袭的进天津医科大学硕士学位论文一步研究提供了直观的可量化的体外模型。(2)GDNF可
5、增强胰腺癌细胞MIAPaca-2的侵袭转移能力,发挥这一作用的途径可能与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通道和磷脂酰肌醇3激酶(P13K)通道有关。关键词:胶质细胞源性神经营养因子胰腺癌神经侵袭机制促分裂原活化蛋白激酶磷脂酰肌醇激酶一II天津医科大学硕士学位论文Abstractobjective:f{}Buildaco.culturemodelofhumanpancreaticcancercelllineMIAPaca一2andratDRGs.provideanewquantifiablein.vitromodelforthestudyofpancrea
6、ticcancerneuralinvasion.(2)ObservetheactionandbloteffectofGlialcellderivedneurotrophicfactor(GDNF)onneuralinvasionofPancreaticCarcinoma_explorethepossiblemechanismofinducednerveinvasion.Methods:f{1CulturethehumanpancreaticcancercelllineMIAPaca·。-1anddetecttheexpressionoftheRETgen
7、ebyRT·PCR,gettheratdorsalrootganglia(DRGs)allddetecttheexpressionoftheGDNFgenebyRT—PCR.MIAPaca-2cellsandDRGswereculturedinthesameculturedish、inthiswaywebuildtheMIAPaca-2/DRGsCO—Culturemodel.ObservethegrowthandinteractionofthepancreaticcancercellsandDRGsneurite,observethedynamicpr
8、ocessofneuralinvasionofpancreaticcancerc
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