大鼠抗肝癌单域抗体和力达霉素强化融合蛋白构建及其抗肿瘤活性的研究

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1、中国协和医科大学博士学位论文缩略语表3A5AmAEAgbFGFbpBSACDRCAMdAbDABDMSoEDTAELISAF8bFvHRPICsoIgGIVn他CH叩GKankDaLDPmAbOPDPAGE缩略语表absorbanceat490舢activeenediyneantigenbasicfibroblastgrowthfactorbasepairbovinesemmalbumincomplementarydeterminingregionchickembryochorioallantoicmembranedomainantibodydi-azo-删nobenzenedime

2、thylsulfoxideethylenediaminetetraacetateenzymelinkedimmunosorbentassayantigenbindingfragmentofantibodycomplexofVHandVLdomainshorseradishpemxidaseconcentrationOf50％inhibitionimmunoglobulinGintravenousinjectionimmobilizedmetalaffinitychromatographyisopropyl-}thiogalactopyranosidekanamycinI【iIodal

3、tonapoptoteinoflidamycinmonoclonalantibodyo-phenylenediaminepolyacrylamidegelelectrophoresis10大鼠抗肝癌单克隆抗体490nm波长的吸光度活性型烯二炔发色团抗原碱性成纤维细胞生长因子碱基对牛血清白蛋白互补决定区鸡胚尿囊膜单结构域抗体重氮氨基苯二甲基亚砜乙二铵四乙酸酶联免疫吸附分析抗原结合片段VH和vL结构域复合物辣根过氧化物酶半数抑制浓度免疫球蛋白G静脉注射固定金属亲和层析异丙基-B．D-硫代半乳糖苷卡那霉素千道尔顿力达霉素辅基蛋白单克隆抗体邻苯=铵聚丙烯酰胺凝胶电泳中国协和医科大学博士学位论

4、文缩略语表PBSPCRPVDFscFvSDSVHVLVL-LDPVL．LDP．AEphosphate·bufferedsalinepolymerasechainreactionpolyvinylidenefluoridesi”91e-chainvariablef1

5、agmentsodiumdodecylsulfateantibodyvmiableheavychaindomainantibodyvariablelifatchaindomainVL-lidamycinfusionproteinenergizedVL-lidamyeinfusionprotein磷酸盐缓冲液幕台酶链式反应聚

6、偏二氟乙烯单链可变区片段十二烷基硫酸钠抗体重链可变区结构域抗体轻链可变区结构域轻链单域抗体和力达霉素辅基融合蛋自轻链单域抗体与力达霉素的强化融合蛋白中国协和医科大学博士学位论文中文摘要大鼠抗肝癌单域抗体与力达霉素强化融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性研究中文摘要抗体是肿瘤导向治疗的重要工具，用抗体将药物导向病灶能够显著降低药物的副作用。目前抗体已经达到临床应用阶段，不过在抗体药物治疗应用中始终存在着很多局限。首先完整抗体本身是大分子药物，分子量较大，难以穿透到达实体瘤内部。另外，单克隆抗体的鼠源性会诱发人抗鼠抗体反应，而小型化抗体能够同时解决上述两个问题，因此在抗体药物研究领域药物分子小型

7、化成为新的研究趋势。在抗体的小型化中研究人员主要着眼于F(ab’)2、Fab、scFv以及单域抗体(dAbs)等。单域抗体的分子大小只有全抗的1／12，同时它的免疫原性很低。除此之外，单域抗体和其它抗体小型化分子一样具有较高的肿瘤穿透率，用单域抗体作为小分子导向药物的“载体”携带高效药物能够构建强效的抗体药物。本研究中，我们构建并制备大鼠抗肝癌单克隆抗体3A5衍生的单域抗体以及单域抗体和力达霉素的强化融合蛋白，并对其生物活性进行了研究。1．大鼠mAb3A5的免疫亲和性检测大鼠抗肝癌单克隆抗体3A5是用人肝癌Bel7402细胞免疫LOu，C大鼠后取其脾细胞和IR983F浆细胞融合的杂交

8、瘤细胞所产生的。我们采用免疫细胞组化的方法对mAb3A5进行的检测。免疫荧光分析结果表明mAb3A5主要存在于Bel7402的细胞膜上。同时Westernblot分析表明mAb3A5特异的与Bel7402细胞的40kDa和60kDa蛋白相结合。这些结果表明mAb3A5可以在抗癌导向治疗中作为一个有效的抗癌药物“载体”。2．制备、构建以及表征大鼠抗肝癌轻链单域抗体VL以及单域抗体与力达霉素强化融合蛋白vL．LDP-AE单域抗体(singledomainant