cd4+cd25+treg在大鼠eae免疫耐受机制中作用的研究

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1、中图分类号UDCR741610硕士学位论文学校代码密级CD4+CD25+Treg在大鼠EAE免疫耐受机制中作用的研究ThemechanismofCD4+CD25+Tregcellsint01eranceofratexperimentalautoimmuneencephalomyelitis作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：师佩佩I临床医学神经病学湘雅二医院李罗清教授谭利明教授论文答辩日期21互：篁：!≥答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在

2、导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。作者签名：．!!塑盈』盈日期：卫年』月旦日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家

3、或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：!!塑!猫：爷师签名堑日期：二坐年±月3日作者签名：!!塑!猫：爷师签名．型!垫日期：二坐年±月必日CD4+CD25+Treg在大鼠EAE免疫耐受机制中作用的研究摘要目的：本研究观察经鼻腔连续多次给予大鼠小剂量髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein，MBP)多肽段MBP68．86，对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)发生发展的影响，通过检测脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(Reg

4、ulatoryTcell，Treg)在CD4+T细胞中的比例、螺旋转录因子Foxp3mRNA表达水平、细胞因子白介素(IL)．17A、转化生长因子(TGF)一D1含量，探讨Treg在MBP68．86经鼻黏膜诱导的大鼠EAE免疫耐受机制中的作用。为探索多发性硬化(Multiplesclerosis，MS)新的治疗方法提供有意义的基础实验依据。方法：将30只6．8周龄雌性Wistar大鼠随机分为3组，设耐受组、免疫对照组、空白对照组，每组10只。耐受组大鼠经鼻腔给予O．5m咖l浓度的ⅧP68．8660ul，免疫对照组予

5、等量的PBS，每日1次，连续10天，空白对照组未予任何处理，末次给予ⅧP68-86后第2天，两组大鼠均足垫注射200¨gMPB68-86与完全弗氏佐剂(CompleteFreund’sadiuVant，CFA)，并分别在免疫当天与免疫48小时后腹腔注射百日咳毒素(pe咖ssistoxin，PTX)免疫建立EAE模型，空白对照组注射等量PBs+CFA。每日予神经功能评分并记录发病情况，在发病高峰期免疫第16天时断头处死大鼠迅速取出脾脏。取脑组织行娅染色观察中枢神经系统(CNS)炎症情况，分离脾脏制得脾淋巴细胞悬液，流

6、式细胞术(FCM)检测各组大鼠脾细胞中CD4+CD25+Tre∥CD4+T比例，逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)检测大鼠脾细胞Foxp3mIⅢA表达水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脾细胞上清IL一17A、TGF—B1的水平。结果：(1)各组大鼠神经功能变化病程中空白对照组大鼠均未发病，耐受组与免疫对照组大鼠在免疫后7．11天相继发病，但与免疫对照组相比，耐受组大鼠平均发病日期延长(尸

7、高峰期既染色可见脑组织多部位、血管周围大量炎性细胞浸润，小血管明显扩II张，成“袖套样’’改变，而耐受组大鼠上述病变明显减轻，空白对照组鼠脑组织皿染色几乎未见炎性浸润灶；(3)大鼠脾细胞CD4+CD25+Tre∥CD4+T细胞耐受组大鼠脾CD4+CD25+Tre∥CD4+T细胞比值高于免疫对照组(尸O．05)：(4)大鼠脾细胞Foxp3mRNA表达耐受组大鼠脾细胞Foxp3m砌妊表达量高于免疫对照组(尸

8、(PO．05)；(5)大鼠脾细胞上清液白介素几．17A、转化生长因子(TGF)一p1浓度耐受组大鼠脾细胞上清液IL．17A浓度低于免疫对照组俨