mmp-9在eae大鼠脊髓中的动态变化及普罗布考的干预作用

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1、河北医科大学硕士学位论文MMP--9在EAE大鼠脊髓中的动态变化及普罗布考的干预作用姓名：孙丽丽申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：檀国军201203中文摘要MMP．9在EAE大鼠脊髓中的动态变化及普罗布考的干预作用摘要目的：多发性硬化(multiplesclerosis，MS)是一种中枢神经系统慢性炎症性脱髓鞘疾病，它的典型病理特征是炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴索变性以及胶质细胞增生等。目前许多研究表明多发性硬化早期即存在血脑屏障破坏，并推测其可能是多发性硬化发病的关键环节之一。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experime

2、ntalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)被公认为是MS的理想模型。其临床表现及病理改变与多发性硬化极为相似，为研究MS免疫病理学机制及其实验治疗的最佳动物模型。基质金属蛋白酶．9(Matrixmetalloproteinases．9，MMP．9)是一类是锌离子依赖的蛋白酶，具有破坏血脑屏障，降解细胞外基质、髓鞘碱性蛋白的作用，可以导致血管内皮细胞通透性增高，进而导致T淋巴细胞等炎症细胞穿透血管基底膜进入中枢神经系统。MS血脑屏障的破坏、炎性细胞浸润、髓鞘降解以及轴索的损伤等主要病理过程均与MMP

3、s活性异常增高有关，推测MMPs参与了MS的发病，但其具体机制尚不清楚。以前我们认为Thl介导了MS的发生，但是近年来随着对Thl7细胞的深入研究人们发现IL．23／IL．17炎症轴对MS起更重要的作用，IL．17是Thl7细胞产生的一种强力致炎因子，与MS关系密切。研究发现氧化应激在MS发病过程中起重要的作用，普罗布考是一种降脂药物，但同时又具有强力的抗炎、抗氧化、清除自由基等作用，可通过抗炎、减轻氧化应激反应、清除自由基等作用而减轻细胞的损伤。近年来研究发现普罗布考可用于多种疾病的治疗，但是普罗布考用于多发性硬化的研究很少

4、，普罗布考能否通过它的抗炎、抗氧化、清除自由基等作用，调节MMP．9、IL．17表达减轻EAE大鼠中枢神经系统损伤?目前研究甚少。本研究通过普罗布考对EAE大鼠的干预来动态观察血脑屏障损伤和血清炎症相关指标的变化，了解其是否对EAE有保护作用，从而为临床治疗MS提供新的思路和实验依据，并且可直接应用于临床。通过对相关指标的测定、分析，进一步了解MS的发病机制方法：中文摘要1实验分组及干预措施选取Wistar大鼠120只，雌性，6．8周龄，体重180～2209，随机分为四组，每组30只。对照组，用生理盐水加CFA注射动物。EAE

5、组，以小剂量豚鼠全脊髓匀浆及含有卡介苗的CFA免疫动物，建立EAE模型。普罗布考．EAE组，以小剂量豚鼠全脊髓匀浆及含有卡介苗的CFA免疫动物，建立EAE模型，免疫当天开始给予普罗布考(500mg／kg·d)灌胃，直至处死。泼尼松+EAE组，以小剂量豚鼠全脊髓匀浆及含有卡介苗的CFA免疫动物，建立EAE模型，免疫当天开始给予泼尼松(5mg／kg·d)灌胃，直至处死。四组动物每组按免疫后O，3，7，lO，14，2l天6个时间点分为6个亚组。2动物模型的建立豚鼠麻醉，冰上取脊髓全长，仔细去脊髓包膜并称重，加入10倍量冰盐水，制成豚

6、鼠脊髓匀浆(GPSCH)，再加入等体积含6mg／mL卡介苗的完全福氏佐剂(CFA)，冰上抽打制成油包水乳剂，为完全免疫抗原。按O．5ml／只分别于大鼠四肢足垫及背部皮下注射抗原匀浆，建立EAE动物模型。3临床评分免疫后，观察动物精神反应状态、体重及活动等情况变化，并进行神经功能评分。评分采用国际通用的Kono评分标准。4检测指标取腰膨大组织制做石蜡包块，行HE染色，用免疫组织化学法测定脊髓腰膨大中MMP．9的表达。ELISA试剂盒检测血清IL．17含量。结果：l发病情况：(Fi91)(Table2)大鼠在抗原免疫诱导后逐渐出现

7、精神萎靡，食欲不振，体重减轻，皮毛不光滑等情况，并逐渐出现尾部无力、后肢无力、前肢无力甚至大小便失禁等临床症状，大鼠发病临床表现呈动态性变化，普罗布考．EAE组、醋酸泼尼松．EAE组大鼠发病时间，病情高峰期均推迟，症状较EAE组轻。2神经功能评分：(Table1)普罗布考．EAE组大鼠免疫后第14天神经功能评分低于EAE组，具有统计学意义(P

8、无统计学意义(P>O．05)。3组织病理学改变：(Fi92．5)EAE组7天组、10天组、14天组、21天组大鼠脊髓均可见不同程度的炎性细胞浸润，尤以14天组大鼠脊髓内炎性细胞浸润的程度最为显著，血管周围出现密集的袖套样炎性细胞浸润。普罗布考．EAE组、醋酸泼尼松．EAE组不