吡硫翁铜抗肿瘤作用及其对硼替佐米的联合增敏效应

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1、分类号:R363密级：一般UDC:612编号：2010212675广州医科大学2010级硕士研究生学位论文吡硫翁铜抗肿瘤作用及其对硼替佐米的联合增敏效应硕士研究生：宋文彬导师：刘金保教授申请学位级别：医学硕士年级：二零一零级学科专业：药理学研究方向：泛素-蛋白酶体系统论文提交日期：二零一三年六月论文答辩日期：二零一三年六月学位类型：医学科学学位学位授予单位：广州医科大学答辩委员会主席：评议人：二O一三年六月万方数据广州医科大学2010级硕士研究生学位论文吡硫翁铜抗肿瘤作用及其对硼替佐米的联合增敏效应Copperpyrithioneexertsanti-cancereffectsanditssy

2、nergisticeffectscombinewithbortezomib学位申请人：宋文彬学号：2010212675年级：2010级院系名称：广州医科大学研究生院专业名称：药理学指导老师:刘金保教授导师单位：广州医科大学研究生院二O一三年六月2万方数据目录中文摘要………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………5中英文对照表…………………………………………………………9前言………………………………………………………………10材料与方法……………………………………………………………12结果………………………………………………………………

3、23讨论………………………………………………………………25结论………………………………………………………………28附图………………………………………………………………29参考文献………………………………………………………………38综述………………………………………………………………42参考文献………………………………………………………………56致谢………………………………………………………………65原创性声明……………………………………………………………66学位论文知识产权声明………………………………………………66关于学位论文使用授权的说明………………………………………66万方数据中文摘要

4、吡硫翁铜抗肿瘤作用及其对硼替佐米的联合增敏效应学科专业：药理学硕士研究生：宋文彬导师：刘金保教授中文摘要背景蛋白质是参与生命活动的重要物质，维持蛋白质合成与降解的动态平衡是一切生命保持正常生理功能的必要条件。细胞内蛋白质的降解有两条途径，即溶酶体途径和泛素-蛋白酶体途径。其中泛素-蛋白酶体途径（ubiquitin-proteasomepathway,UPP)是真核细胞、古细菌和其他一些细菌胞内降解蛋白质的通路之一。在真核细胞的细胞核和细胞浆中，80%以上的蛋白质，包括调控细胞周期、细胞程序性死亡以及感染等重要信号途径的调节蛋白均受此途径的降解调控。蛋白酶体的主要功能是蛋白质水解作用降解不需要的

5、和损伤的蛋白质，其生化本质就是通过水解蛋白质的肽键，把大分子的蛋白质水解为短肽片段，进而影响细胞的增殖、分化、凋亡、DNA复制和修复、转录和蛋白质控制等。该通路的功能改变会引起蛋白质降解的异常，进而导致细胞功能的异常。人体的许多疾病如肿瘤、神经系统疾病等的发生与UPP功能异常密切相关，因此UPP已经成为多种疾病治疗的新靶标。研究和开发干扰该途径的药物,为多种疾病的治疗提供了新的治疗策略。目前抗肿瘤的主要策略包括烷化剂、抗代谢物和细胞毒药物，以及与有丝分裂、拓扑异构酶和酪氨酸激酶相关的抑制剂。金属配合物在药物设计和肿瘤治疗中展现了独特的性质，顺铂及其类似物作为睾丸癌和卵巢癌最有效的化疗药物应用于

6、临床一线。但是其存在的毒性也促使新的高效低毒的药物的开发。Q.PingDou等人报道铜的配合物具有抑制细胞26S蛋白酶体的功能，为蛋白酶体抑制剂的开发开辟了新途径。研究目的1万方数据广州医学院硕士学位论文本研究前期实验表明吡硫翁铜（CopperPyrithione,CuPT）对细胞上26S蛋白酶体有明显的活性，对纯化的20S蛋白酶体则没有抑制效应，提示CuPT可能作用于19S进而影响26S蛋白酶体活性的。进一步的研究表明CuPT对19SRP去泛素化酶USP14、Uch-L5和Rpn11(POH1)具有抑制效应。因此如果将去泛素化酶CuPT和20S蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib,V

7、elcade)联合应用将对肿瘤细胞的泛素-蛋白酶体通路起到双重抑制的效应，从发挥更好的抗肿瘤效应。实验方法1、细胞活力测定：采用MTS法检测去泛素化酶抑制剂CuPT联合20S蛋白酶体抑制剂万珂（Velcade,Vel）对肿瘤细胞活力的影响。2、细胞死亡检测：采用AnnexinV-FITC/PI双染荧光显微镜观察并拍照记录CuPT联合Velcade（Vel）对细胞的形态学变化；同时用流式细胞仪分析细