mtor、fkbp38在sod1-g93a转基因小鼠中的研究

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯小1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文mTOR、FKBP38在SODl．G93A转基因小鼠中的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7月iJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．／材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯叫14附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．16附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l9讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯㈡20结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．,22参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯㈠23综述roTOR功能及调节通路⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

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4、l=26致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯㈠33个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．i34中文摘要mTOR、FKBP38在SODl．G93A转基因小鼠中的研究摘要目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotrophiclateralsclero

5、sis，ALS)是1种以运动神经元选择性丢失为特征的神经系统退行性疾病，其表现为肢体无力和瘫痪，并最终发展至呼吸肌无力，进而危及生命，一般在发病后B．5年死亡。目前，关于ALS发病机制的研究有很多，主要有遗传、谷氨酸盐的毒性、氧化损伤、神经细丝的改变、蛋白质异常聚集、神经炎症、线粒体变性、自身免疫、及自噬功能的异常等。近年来，自噬功能的异常逐渐成为人们的研究热点。mTOR(mammaliantargetofrapamycin)，即为哺乳类雷帕霉素的靶点，是关于细胞生长和新陈代谢的调节器。roTOR调节细胞的过程，包括mRNA的翻译，核糖体的形成

6、，自噬，以及新陈代谢筝。通过对来自外界环境信号的整合，mTOR完成了对下游的调节与输出。mTOR是自噬的关键调节点，在生长因子存在和营养丰富的情况下，使自噬通路关闭，进而抑制自噬。雷帕霉素对mTOR有抑制作用，实验证明，雷帕霉素可以通过抑制自噬的负性调节位点mTOR而激活自噬。生理条件下，111ToR的活动是受至URheb(Rashomologenrichedinbrain)所调节的。Rheb，作为RAS样的dxGTP酶，位于mToR的上游，对mToR的活性越着正性的激活作用。作为细胞生长的中心性质的调节者，通过营养和细胞生长的信号来控制广谱的

7、细胞活动。研究表明，Rheb对InToR的激活是通过拮抗其内源性抑制剂FKBP38(FK506．bmdingprotein38)而完成的。FKBP38，是FK506绑定蛋白家族的成员。其被药物抑制后，显示了强大的神经保护作用和再生能力，表明了FKBP38的异构酶在调节细胞存清以及稳定性上的能力。在生长因素缺乏或者氨基酸被剥夺的情况下，FKB]I)38直接与mToR结合进而下调了mToR的活性。当氨基酸和生长因子再次恢复时，Rheb与FKBP38相互作用，阻止了其与mTOR的结合，使mToI

8、I解除了失活状态，恢复了活性。SODl．G93A转基因

9、小鼠是目前研究ALS较理想的动物模型之一，I本研究通过观察随着疾病的进展，SODl．G93A转基因小鼠腰髓中mTOI#、FKBP38含量的变化，探讨在ALS中，调节细胞诸多过程的mTOR，与中文摘要其内源性抑制剂FKBP38的变化对自噬可能产生的影响。进而推断这一变化在ALS中的意义，为ALS的进一步研究提供了理论依据。方法：选取SODl一G93A转基因小鼠为实验组，根据病程及症状分为症状前期组、症状期组、终末期组；选取100天的阴性小鼠作为对照组，各组8只。通过腹腔注射水合氯醛对小鼠进行麻醉并处死。在4℃条件下迅速剥离腰髓，置于EP管中，保存

10、在．80℃超低温冰箱。用多聚甲醛固定小鼠，分离小鼠腰髓，于多聚甲醛液中固定保存。利用免疫组化技术观察SODl．G93A小鼠腰髓FKBP38、mTOR的免疫活性；同时，利用Westernblot方法，检测随着疾病的进展，SODl．G93A小鼠腰髓中，FKBP38、mTOR含量的变化。并利用spssl3．0软件对数据进行分析。结果：1SODl．G93A转基因小鼠腰髓mTOR在不同阶段的表达：利用免疫组织化学技术，我们发现：随着疾病的进展，SODl．G93A转基因小鼠组腰髓神经元的数量较阴性对照组减少，神经元内mTOR免疫活性降低；利用Westemb

11、lot技术检测SODl．G93A转基因小鼠腰髓mTOR表达量，随着疾病的进展，SODl．G93A转基因小鼠腰髓中mTOR的含量较对照组明显减少。与阴性