parkin蛋白在sod1-g93a转基因小鼠腰髓中的表达

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所彳亍。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：抹Ji；8趣导师签章：孽差警二级学院签章刀易年研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研

2、究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：殊话叛导师签章：__。毫名髫砧／3年弓月；方日＼炎港∥，飞．誓一囊墨∥蓼黟蟹犯目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文Parkin蛋白在SODl．G93A转基因小鼠腰髓中的表达前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66日lJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22综述Parkin功能的研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33中文摘要Parkin蛋白在SODI．G93A转基因小鼠腰髓中的表达摘要目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotrophiclat

4、eralsclerosis，ALS)是一科选择性累及上、下运动神经元的慢性、进行性神经系统变性疾病。其发瘊机制主要涉及氧化应激损伤、谷氨酸兴奋毒作用、线粒体功能异常、细胞内钙离子超载、免疫异常及蛋白异常聚集等几个方面，但确切的发病机钮尚未明确。目前ALS仍缺乏有效的治疗方法，病人的存活期一般仅为3到5年。Parkin由Kitada等人首先克隆并且命名，是常染色体隐性遗传少年型帕金森病(Autosomalrecessiveiuvenileparkinsonism，ARIP)的致病基旦j。Parkin作为泛素化E3连接酶，其N．末端为泛素化结构，C．末端为RI

5、NG结构。RING结构由两部分组成，即RINGl、RING2，其拥有泛素化连接酶的活性，直接参与了泛素化过程。有研究表明：过表达Parkins⋯匕够保护神经元，可以抵抗因过表达或内源性底物蛋白积聚而产生的毒性侵害。Ⅱ：常情况下，当线粒体膜电位发生改变时，一部分Parkin从胞浆转移至线粒体，发挥泛素化作用，同时激活线粒体自噬。此外，Parkin蛋白对运动神经元的保护作用，还表现在其与抗凋亡蛋EIBcl．2相互作用，发挥抗凋亡功·耗。Parkin蛋白的酶活性丧失，将影响泛素蛋白酶体系(Ubiquitin-proteasc·mesystem。UPS)的功能，导

6、致未泛素化的底物蛋白异常聚集，造成细胞损伤，最终导致细胞死亡。研究发现：在帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)和阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)患者尸检组织中，均发现Parkin蛋白的表达量存在改变。PD、AD与ALS都是神经系统变性疾病，存在选择性神经元的丢失，发病机制均涉及到异常蛋白聚集、氧化应激、兴奋性毒性、线粒体功能障碍和凋亡等途径。SODl．G93A转基因小鼠是目前研究ALS较理想的动物模型之一。本实验欲通过对SODl．G93A转基因小鼠腰髓中Parkin蛋白表达量的研究．观察Parkin蛋白在SOD1

7、．G93A转基因小鼠腰髓中变化情况，分析Parkin蛋白在ALS中潜在的作用及意义，进一步探讨ALS可能存在的发病机制。方法：选用SODl．G93A转基因小鼠，本实验分为对照组和实验组。中文摘要选取100天的阴性小鼠作为对照组，实验组按时间点分为症状早期(60d)，症状期与终末期三个亚组，各组5只小鼠。10％水合氯醛(350mg／Kg体重、)腹腔麻醉小鼠后，摘除小鼠双侧眼球放血，取小鼠的腰髓，称重后立即放于液氮中，然后放．80℃超低温冰箱保存直至Westernblot时使用。4％多聚甲醛经心脏灌注，之后剥离小鼠腰髓，用4％多聚甲醛浸泡保存组织至免疫组化时使

8、用。利用免疫组化和westernblot分析方法，观察SODl．G