p-eif2α在家族性肌萎缩侧索硬化模型hsod1g93a转基因小鼠腰髓中的表达变化

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2、行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签章：卜咩Ⅻ，；年专月工3日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文p-eif2a在家族性肌萎缩侧索硬化模型hSOD1G93A转基因小鼠腰髓中的表达变化前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8日lJ看⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30综述PERK通路与肌萎缩侧索硬化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46中文摘要P-eif2a在家族性肌萎缩侧索硬化模型hSODIG93A转基因小鼠腰髓中的表达变化摘要目的：肌萎缩侧索硬化(AmyotrophicLateralSclerosis，ALS)是最

4、常见的运动神经元病，它以皮层、脑干以及脊髓的运动神经元的进展性变性为特征，导致肌萎缩、瘫痪，最终因呼吸肌功能障碍而死亡。大约5％．10％的ALS是遗传性的(家族性)，大多数是散发的ALS。研究证实基因突变与ALS的发病相关，SODl是第一个被认知的突变基因，在家族性的ALS中，大约10％．20％与SODI的突变有关。表达人突变SODl基因的转基因小鼠的临床以及病理表现与人ALS极为相似，因此建立了许多表达人突变SODl的转基因小鼠模型，其中hSODlG93A转基因小鼠应用最广泛，是国际上公认的ALS的动物模型，用来阐述ALS的发病机制以及作为临床药物研究的动

5、物模型。作为一个多因素作用的疾病，除了基因突变外，蛋白的错误折叠以及聚集、谷氨酸兴奋毒性、神经炎性、氧化应激和线粒体的功能障碍、细胞骨架异常以及轴浆运输缺陷等也参与ALS的发病。近年来，内质网应激作为ALS一个新的发病机制，被深入研究。内质网作为分泌路径中一个重要的细胞器，参与了蛋白质的合成、折叠和翻译后修饰，还参与脂类代谢、钙的存储，同时将这些合成与修饰后的蛋白质运输到其他细胞器。内质网内蛋白折叠能力下降、钙平衡紊乱都会引起内质网应激(endoplasmicreticulumstress，ERS)。在hSODl删认转基因小鼠中，突变SODl基因表达突变的S

6、ODl蛋白，突变的SODl蛋白易于在内质网腔内聚集以及形成包涵体，引起内质网应激。其主要通过未折叠蛋白反应(unfoldedproteinresponse，UPR)和内质网相关降解(endoplasmicreticulumassociateddegradation，ERAD)途径清除突变的SODl，减轻内质网负荷，恢复内质网稳态。若不能及时清除突变SODl，SODl突变蛋白大量聚集，则会引起细胞凋亡。UPR表现为PEKR通路、IREl通路、ATF6通路的激活。其中PERK作为第一个被激活的信号通路，在ALS的发病机制中具有重要作用。本实验以hSODlG93A

7、转基因小鼠为研究对象，以P．eif2a作为PERK中文摘要通路激活的靶点，通过观察其在hSODlc狰3A转基因小鼠腰髓中的变化，来研究在hSODIG93A转基因小鼠腰髓中是否存在PERK通路的激活，进而探究内质网应激在ALS发病机制中的作用。方法：1．动物模型的获得与分组以B6SJL．TG(SODl．G93A)lGur／半合子雄鼠与B6SJLF／F1／J+／+雌鼠交配，获取其子代小鼠，剪尾提取DNA，进行hSODlG93A基因的PCR反应，鉴定出含hSODlG93A基因的阳性小鼠和不含该基因的阴性小鼠。将hSODlG93A转基因小鼠分为：28天组(出生后28

8、天)、35天组(出生后35天)、49天组(出生后49