雄激素对sod1-g93a转基因小鼠发病机制作用的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：宅识唬导师签章獬二级I研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写

2、的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：吏酮魄导师签章：撇矽／珲；月落目目录IIYIIl《12lll

3、3llU3lll7llllll6lllluznllll8llllEY2337628中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5研究论文雄激素对SODl．G93A转基因小鼠发病机制作用的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1。11日IJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Z^．Unj：日歹咔≮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述肌萎缩侧索硬化与性别间关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51中文摘要雄激素对SODl．G93A转基因小鼠发病机制作用的研究摘要目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotrophiclateralsclerosis，ALS)是一种进行性和致命性神经退行性疾病，累及运动皮层、脑干及脊髓前角运动神经元，逐渐出现进行性加重的衰弱和骨骼肌萎缩，最终导致瘫痪和死亡【l】。临床特征是上、下运动神经元受损的症状并存，而感觉和括约肌功能一般不受影响，其发病机制尚不明确。约5．10％为家族性ALS(familialALS，f

6、ALS)，90．95％是散发性ALS(sporadicALS，sALS)。大约20％家族性ALS病例及4％散发性ALS病例与铜锌超氧化物歧化酶(Cu／Znsuperoxidedismutase1，SODl)突变有关。ALS是一种多因子疾病，遗传和环境因素，如毒素和感染，通过协同作用影响疾病的发生和发展【2】。流行病学研究表明职业，如接触重金属或化工、机械或电气创伤和剧烈的体育活动等可能影响ALS的发病率。年龄和性别是与本病重要的相关危险因素【3一，可影响疾病的发生发展及临床表现。事实上，ALS多为中年发病，发病年龄高峰为45．7

7、0岁，男女发病率未2．6：1t51，导致这一差异的原因尚不清楚，暗示性激素可能参与该病的发生。在过去的1O多年里，一些研究证实性激素对发育期和成人正常神经活动具有显著的营养作用【6，7】，尤其是雄激素(睾酮和双氢睾酮)可影响体内脊髓和脑干运动神经元的形态和存活【8，9】，脱氢表睾酮和硫酸脱氢表雄酮(D卸三AS)为主要的循环类固醇，可以抑制谷氨酸介导的神经毒性11oJ作用。此外，研究证明雌激素通过也可基因组和非基因效应发挥明显的神经保护作用【l¨。本研究在此基础上，在无菌条件下对50天雄鼠进行去势手术，应用免疫组化方法研究了SOD

8、l．G93A转基因小鼠腰髓的形态学变化情况，应用免疫印迹法研究突变SODl蛋白、自噬标示物LC3II和P62、氧化应激标示物HO．1和GCLM及凋亡指标CASPASE3随病程进展表达变化，探讨雄激素对雄性SODl．G93A转基因小鼠病情变化及发展的影响，研究导致ALS发病具有明显性别差异的可能机制，为以后ALS的诊断和个体化中文摘要治疗提供实验依据。方法：1转基因鼠的繁殖动物实验过程严格遵守河北省实验动物管理办法规定，所有SODl．G93A转基因鼠均饲养在恒温(25．27℃)、恒湿、无特定病原菌(specificpathogen

9、free，SPF)环境中，喂以灭菌的SPF级颗粒型鼠类饲料和无菌水。为维持B6SJL．TgN(SODl．G93A)1Gur转基因小鼠突变基因稳定下传，用B6S几SODl．G93斛半合子雄鼠与B6SJLFl／J雌鼠交配繁殖，两种小鼠均购自美国Jackson实验室(