青岛文昌鱼sra基因克隆、表达及进化分析的研究

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1、独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得山东理工大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解山东理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅；学校可以用不同方式在

2、不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日万方数据山东理工大学硕士学位论文摘要摘要文昌鱼属于脊索动物门中的头索动物亚门，处于由无脊椎动物到脊椎动物的过渡位置。作为从无脊椎动物到脊椎动物过渡阶段的典型动物，文昌鱼一直是研究动物进化和胚胎发育的模式动物。SRA基因是一种类固醇激素受体的转录辅激活因子，也是首次发现的可以从RNA和蛋白质两个水平上发挥作用的分子。目前

3、，对SRA基因的研究主要集中在在脊椎动物中,而在进化上占据关键位置的文昌鱼中是否存在SRA基因还不清楚。本论文首先通过5’-RACE技术克隆了青岛文昌鱼SRA基因，命名为AmphiSRA。AmphiSRA基因序列全长1542bp，含有一个525bp的最大开放阅读框(ORF),编码有174个氨基酸组成的蛋白质，推测其分子量约为19.5kDa。5’端含有一段165bp的非翻译区(UTR)，3’端含有一段852bp的非翻译区。序列经NCBIBLASTP程序比对，发现其具有完整的SRA基因家族编码框。我们利

4、用Northern杂交的方法，对AmphiSRA基因是否在青岛文昌鱼中存在和大小进行了鉴定。杂交结果显示出三条条带，大小分别约为4kb,1.6kb和500bp，我们得到的cDNA与其中一条大小一致。利用整体原位杂交检测文昌鱼的成体切片以及各时期的胚胎发现，AmphiSRA广泛分布于文昌鱼各个组织中，在脊索、神经索、鳃、肠以及卵巢和精巢中表达尤其明显，并且胚胎和成体中的表达情况一致。AmphiSRA是否属于表达蛋白质类型，我们通过构建原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达来解决这一问题。通过对重组菌株的S

5、DS-PAGE，我们发现AmphiSRA确实如我们推测的那样，属于可以表达蛋白质的亚型。经过His-tag抗体进一步的Western杂交鉴定，确实得到了特异性表达。关键词：青岛文昌鱼；AmphiSRA；基因克隆；原位杂交；原核表达I万方数据山东理工大学硕士学位论文ABSTRACTABSTRACTAmphioxusbelongstothecephalochordate,andisexposedtothepositionoftheinvertebratestovertebrates.Asaresult,

6、amphioxushaslongbeenregardedasthemostimportantanimaltostudytheoriginandevolutionofvertebrates.SRA,asteroidreceptorcoactivator,isthefirstfoundmoleculethathastheunusualpropertytofunctionbothattheRNAandtheproteinlevels.sites．Numerousinvestigationshavebeen

7、carriedoutininvertebrates,butlittleisknowntodateaboutitintheamphioxusBranchiostomabelcheri．Inthispaper,weused5’-rapidamplificationofcDNAends(RACE)toobtainthefull-lengthsequenceofSRAfromAmphioxusBranchiostomabelcheritsingtauense,namedAmphiSRA.Thefulllen

8、gthofAmphiSRAcDNA(GenBankaccessionnumber:JN384108)obtainedwas1542bplongwitha5’-untranslatedregion(UTR)of165bpanda3’-UTRof852bpwiththepolyadenylationsignalandapolyadenylationtail.TheORFofAmphiSRAencodedapolypeptideof174aminoacidswithacal