负载吉西他滨的红细胞载药系统的建立及体外抗肿瘤作用评价

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1、隶劫大·粤临床医学硕士学位论文万方数据负载吉西他滨的红细胞载药系统的建立及体外抗肿瘤作用评价万方数据Establishmentcarriererythrocytesdrugdelivery．syst--eandevaluationoftheSystemsanevaluatloUOltlleGemcitabineloadederythroytesinvitroAThesisSubmiaedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedici

2、neBYXIYunSupervisedbyDr．QtANXiaopingSchoolofMedicineSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研

3、究生签名：日期：丝f生二虻一东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：二卑韭导师签名：盏!尘!辱期：删l万方数据中文摘要负载吉西他滨的红细胞载药系统

4、的建立及体外抗肿瘤作用评价东南大学临床医学硕士研究生：席芸导师：钱晓萍研究背景：将抗肿瘤药物通过载体靶向运送至肿瘤组织后再释放，是降低药物毒副作用，减少用药剂量，增强药物在局部药效的有效办法。自体血液中分离的红细胞有作为药物载体的潜能，具有较好的安全性、有效性和易耐受性。吉西他滨(2’．脱氧-2’，2’一二氟胞菅)，是一种临床广泛使用的经典化疗药物，常应用于非小细胞肺癌、胰腺癌、头颈部鳞癌、宫颈癌、膀胱癌、卵巢癌和甲状腺癌等的治疗，尤其在局部晚期或转移性胰腺癌、膀胱癌中。但是，其在临床使用过程中，仍

5、具有生物利用度低、毒副反应明显，易产生获得性耐药等局限性。研究目的：1、改良已有建立载体红细胞的方法，通过计算载药率寻找用载体红细胞包载吉西他滨的最佳载药条件。2、评价载药过程对载体红细胞膜结构和功能的影响；评价载吉西他滨红细胞在体外低温贮存的稳定性；评价载体红细胞对包载的吉西他滨的缓释能力。3、以裸药吉西他滨作为对照组，用人肺腺癌细胞株A549及人胰腺癌细胞株BxPC-3评价载吉西他滨红细胞的抗肿瘤作用。研究方法：l、用低渗膨胀．高渗再封技术来建立负载吉西他滨的红细胞载药系统，包载过程中设定不同的

6、吉西他滨浓度及再封时间，通过用2种方法计算载体红细胞对吉西他滨包载率来寻找最佳载药条件。万方数据东南大学硕士学位论文2、通过对比红细胞载药前后的形态变化及渗透脆性变化来评价载药过程对红细胞膜结构和功能的影响。将载吉西他滨红细胞的PBS悬液置于4。C环境中，每天检测上清液中吉西他滨的药物浓度，同时观察红细胞形态，评价载吉西他滨红细胞的贮存稳定性。将载吉西他滨红细胞置于透析袋中，放置在37。C的PBS液中，每间隔一定时间检测透析袋外液中吉西他滨的药物浓度，绘制“时间．药物浓度’’曲线，观察载体红细胞对包

7、载的吉西他滨的释放情况。3、用MTT法评价载吉西他滨红细胞的细胞增殖抑制作用。将不同吉西他滨浓度的载吉西他滨红细胞作用于人肺腺癌细胞株A549及人胰腺癌细胞株BxPC．3，作用24小时及48小时后测定OD值，计算细胞增殖抑制率，对比同等浓度裸药吉西他滨作用于A549及BxPC．3细胞24小时及48小时后的细胞增殖抑制率。研究结果：1、用低渗膨胀．高渗再封的技术建立负载吉西他滨的红细胞载药系统，能获得的最大载药率约为73．8％。2、高倍镜下观察载吉西他滨前后载体红细胞的瑞氏染色血细胞涂片，红细胞形态无

8、明显变化，对比载吉西他滨前后载体红细胞的渗透脆性曲线无统计学差异。载体红细胞对包载的吉西他滨能稳定释放，48小时后释放率接近100％。3、载吉西他滨红细胞作用于A549细胞24小时后对比裸药吉西他滨组，仅在吉西他滨浓度为780ng／ml时，载吉西他滨红细胞的细胞增殖抑制作用强于裸药吉西他滨(P>O．05)；作用48小时后载吉西他滨红细胞对细胞的增殖抑制作用较裸药吉西他滨的优势进一步增加，尤其在吉西他滨浓度为780ng／ml时，两组差异有统计学意义(P<0．05)。载吉