胰腺癌细胞来源的exosomes的提取、鉴定及体内分布的初步研究

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1、隶韵大◆粤硕士学位论文万方数据胰腺癌细胞来源的exosomes的提取、鉴定及体内分布的初步研究万方数据JIlJlllIJIHIHIlllJlllllllJIIJY2707307THEPURⅡilICATIoNANDⅡ，ENTⅡfICATIONoFⅡIEPANCREATICCANCERDERIVEDEXOSOM匮SANDOBSER哪IONTHEIRDIsTRmUTIONINVⅣoAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYRenLongSupervisedby

2、Prof．ZhouJiahuaMedicalCollegeofSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的

3、复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。速妒卤‘诊万方数据中文摘要胰腺癌细胞来源的exosomes的提取、鉴定及体内分布的初步研究目的：证实体外培养的胰腺癌细胞可分泌CXOSOIFES，初步分析胰腺癌来源的exosomcs在小鼠全身分布情况。方法：1、对不同转移潜能的胰腺癌细胞株panc．02，panc一02一H7进行体外培养，收集上清液，采用差速离心联合蔗糖梯度离心法

4、提取纯化exosomcs，通过BCA蛋白质定量法对eXOSOn肥进行间接定量。并在电镜下使用液相载网法，观察exosomes的形态，以及用WesternBlot对其分子标志物进行鉴定。2、利用共聚焦荧光成像技术，观察PKH67绿色荧光标记的exosomes在小鼠各个主要脏器的分布情况。结果：1、不同肝转移潜能的胰腺癌细胞株pane．02，pane．02．H7均可以产生exosomes。通过电镜观察发现，两种exosomcs在形态上并没有明显差异，均呈现为圆形或椭圆形的囊泡状结构，大小较为均一，直径大多集中在50"--150nm之间。WesternBlot显示，两种e

5、xosomes都表达exosomes特异性分子标志蛋白，CD9、MHC．I、TSGl01，却不含凋亡小体蛋白CytochrormC。电镜形态学鉴定和WesternBlot分子标志物鉴定两者符合性良好。BCA蛋白质定量是较为简便的exosomes的定量方法，并且结果显示等量细胞来源的exosomes的蛋白含量。高肝转移潜能的panc-02．H7高于panc-02(P<0．05)。2、通过共聚焦观察，在小鼠肺、肝、脾、骨髓和脑中能明显的观察到有绿色荧光标记的exosomes分布，相对于其他脏器，肝、脾的分布较多。而单就体内分布，两种exosomcs没有明显差异(尸>0．

6、05)。结论：l、证实了体外培养的不同肝转移潜能的胰腺癌细胞均可分泌典型exosonts。2、等量高转移潜能胰腺癌细胞来源的exosomes的蛋白含量高于低转移潜能胰腺癌细胞来源的exosomes。3、不同肝转移潜能的胰腺癌细胞来源exosomes，在体内肝、脾、肺、骨髓、脑等主要脏器都有分布。关键词：Exosomes；胰腺癌；肿瘤：万方数据AbstractT肛PU对FICATIONANDIDENTIFICATIONOFT既PANCREATICCANCERDE砒VEDEXOSOMESANDOBSERVATIONTHEIRDISTRIBUTIONⅢVIVOlOHect

7、ivelToverifythatpancreaticcareercellscansecretecxogomcsinvitro，andanalyzethedistr五utionofpancreaticcalgy．,crderivedCXOSOITIgSinnllCCVlVO·IMethodsl1,Pancreaticcaw．,crcelllinespane·02，pane-02-H7withdifferentlivermetastaticpotentialwereculturedinvitroandthecellculturesupernatantswcrecol