胰岛素诱导c2c12细胞增殖和凋亡的机制研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterInsulinInducesC2C12CellProliferationandApoptosisMechanismResearchBy：YanyanZhangSupervisor：Prof．QiZhangProf．MingxiZangProfession：PharmacySchoolofPharmaceutialScienceApril2014原创性声明

2、

3、UllIIIILUUUIY2544403本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成

4、果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：磁抱彬日期：刊严年多月压日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或

5、与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：训产莎月日1．2．本课题由以下基金赞助：中国科学与技术部863计划(编号2012AA022501)中国国家自然科学基金(编号81141044)摘要目的胰岛素是一类在人类胰腺中发现的分泌肽激素，它能提高葡萄糖的利用率。已有研究发现胰岛素能诱导C2C12细胞(小鼠成肌细胞，即肌前体细胞)增殖和肌细胞生成。胰岛素如何诱导C2C12细胞增殖的作用机制尚不明确。GATA-6是具有锌指结构的转录因子。GATA．6在心肌细胞分化和保持血管平滑肌细胞分化表型中发挥重要作用。过氧化物酶

6、体增殖物激活受体0【(PPAR0【)在脂类代谢如脂肪酸转运和D一氧化中起着重要调节作用。GATA．6和PPARa是否参与胰岛素对细胞增殖和凋亡的调节将是一项很有趣的研究。细胞凋亡受BCL一2家族蛋白(B．细胞淋巴瘤．2)的调节，BAD(细胞凋亡BCL一2促凋亡蛋白)是BCL．2家族成员之一，能够诱导细胞凋亡。CyclinDl是D型细胞周期蛋白的一种。能与CDK4和CDK6作用激活细胞进入细胞周期。但是有关cyclmDl和BAD在胰岛素处理的C2C12细胞中的表达却知之甚少。方法本研究中我们用MTT法、流式细胞分析、细胞凋亡定量、DAPI染色、荧光素酶报告基因实验、Quantkatwe

7、Real—TimePCR及WestemBlot实验来研究胰岛素对C2C12细胞增殖、凋亡和细胞周期的作用。结果MTT实验结果表明10nM的胰岛素处理C2C12细胞促进细胞增殖(P

8、0nM胰岛素则将细胞周期阻滞在S期。过表达PPARa／GATA-6促进细胞周期进程，在10nM胰岛素处理时该促进作用增强，而50nM和100nM胰岛素处理时则逆转该作用诱导细胞周期阻滞。且PPARa和GATA-6均不能缓解50nM和100nMT摘要胰岛素产生的该阻滞作用。DAPI染色结果显示与对照细胞相比50nM和100nM胰岛素处理的细胞表现出较高水平的染色质固缩，而10nM胰岛素处理的细胞染色均匀未表现出细胞凋亡后染色质固缩。PPARot和GATA．6均不能逆转50nM和100nM胰岛素诱导的细胞凋亡染色质固缩。荧光素酶报告基因瞬时转染实验表明不同浓度胰岛素分别诱导cyclinD

9、l和BAD的转录。10nM胰岛素激活cyclinDl启动子活性，抑制BAD启动子的活性，促进细胞增殖。而50／100nM胰岛素则激活BAD的启动子，抑制cyclinDl启动子活性，诱导细胞凋亡。GATA-6和PPARa均能增强cyclinDl启动子活性，逆转50nM胰岛素诱导的cyclinDl启动子活性的降低，却不能逆转100nM胰岛素产生的作用。而且，GATA．6和PPARa均能抑制50nM和100nM胰岛素诱导的激活BAD启动子活性的作用。Quatit