hdac1反义寡核苷酸对人食管鳞癌ec9706细胞增殖影响

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster(doctor)TheinfluenceofHDAClASODNontheexpressionHDAClinhumanesophagealsquamouscellcarcinomaEC9706cellsBy：WangYueSupervisor:ChengKuishengLiShengleiPathology&PathophysiologyBasicalMedicalCollegeMay2012中文摘要HDACl反

2、义寡核苷酸对人食管鳞癌EC9706细胞增殖的影响研究生王悦导师陈奎生教授李晟磊副教授郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室中国河南郑州450052中文摘要背景和目的食管癌（esophagaealcancer,EC)在我国的发病率和死亡率居世界之首，严重危害着人类的健康，而河南则是我国食管癌发病率和死亡率最高的省份，也是肿瘤相关性疾病在该省死亡的主要原因。以前所采用的放化疗对多数恶性肿瘤而言，疗效并不理想。在医学领域，随着我们对肿瘤特异位点的不断认识、靶向基因治疗的研究以及免疫学和分子生物学的发展，无疑为食管癌的防治提供了一条新的研究思路

3、，使治疗食管癌的征途充满希望。近十余年来，组蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylase,HDACs)在肿瘤发生、发展中的作用已成为业内的研究热点。HDAC1是HDACs分类I型中重要而具有代表性的一员，正常情况下，机体蛋白乙酰化与去乙酰化处于一种平衡状态，当二者失去平衡就会诱发肿瘤发生。病理情况下，尤其在恶性肿瘤组织中HDAC1蛋白出现高强度表达，这可能与肿瘤的产生和演进相关。已有研究证明HDAC1蛋白在胃癌、胰腺癌、大肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、B淋巴瘤等诸多肿瘤组织中过度表达。而在食管癌组织中HDAC1蛋白的表达情况，及其与食管癌产生和演

4、进的研究很少报道。为进一步探讨HDAC1与肿瘤之间的关系，寻找抑制食管癌细胞增生及其转移的有效办法，本实验首先采用免疫组织化学技术检测49例食管鳞癌组织、23例食管癌旁不典型增生组织和49例正常食管粘膜组织中I中文摘要HDACl的表达情况；然后采用反义寡核苷酸技术抑制HDAC1的表达，并利用MTT法检测各组细胞的增殖状况。为运用HDAC1反义寡核苷酸达到靶向治疗食管癌等恶性肿瘤提供理论依据。选材与方法：?1.材料：所釆用标本均来自郑州大学一附院2008年7月至2010年9月间食管癌手术标本49例，选出23例癌旁不典型增生组织、49例癌组织和49例正常

5、食管粘膜组织共同构成此次研究对象，年龄37^75岁之间，平均年龄为55岁，其中女性22例，男性27例。术前上述病例均未接受过其他治疗。2.方法：（1)采用免疫组织化学（SP)法和免疫细胞化学方法检测各组组织及细胞中HDAC1的表达；(2)设计2条HDAC1反义寡核苷酸（AS0DN1、ASODN2)及1条无关序列寡核苷酸（N-ODN)；(3)分别用3种不同浓度（250pg/ml、200^g/ml、150^g/ml)的HDAC1ASODN1、ASODN2和N-ODN，体外培养转染的EC9706细胞72h、48h和24h，另设对照细胞（不予任何处理）；

6、(4)四唑盐（MTT)法检测各组细胞的增殖情况；(5)统计学方法：数据用SPSS13.0行统计学整理，）c2检验用于比较阳性率；均数±标准差G±s)表示计量资料；t检验（t-test)用于比较两组均数；方差分析（ANVOA)用于比较两组以上均数；ct=0.05为检验显著性标准。II中文摘要结果1.HDAC1蛋白在食管癌组织中的表达：HDAC1的免疫细胞化学检测结果判定：HDAC1在人食管癌EC9706细胞中呈阳性表达，集中于胞核，呈棕黄色颗粒。HDAC1蛋白表达在食管鳞癌、非典型增生和正常食管黏膜组织中的阳性率分别为63.27%(31/49)、3

7、9.13%(9/23)、20.41%(10/49)。HDAC1蛋白在食管癌组织中的阳性率和非典型增生与正常食管黏膜组织间进行比较，差异有统计学意义（PO.05);20例伴有淋巴结转移食管鳞癌组织、非典型增生组织及正常食管黏膜组织中HDAC1的阳性表达率分别为：90.00%(18/20)、60.00%(6/10)和20.00%(4/20)；而29例不伴有淋巴结转移食管鳞癌、非典型增生及正常组织中HDAC1的阳性率分别为：44.83%(13/29)、30.77%(4/13)和20.69%(6/29)。食管鳞癌与非典型增生组织中HDAC1阳性率差异有显著性（

8、PO.05);侵达浅肌层、深肌层和食管外膜的食管鳞癌组织中HDAC1阳性率分别为：22.22%