补肾活血固齿方对成骨细胞增殖、分化，bmp-2表达及trpv5trpv6通道影响的实验研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名绷导师签章：张二级学院领导盖章：为I牛年弓月z2日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特．另clDN以标注和致谢等内容外，

2、文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：铀旨翩签章：辙如l辞年≥月≥2日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7研究论文补肾活血固齿方对成骨细胞增殖、分化，BMP一2表达及TRPV5／TRPV6通道影响的实验研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8一日U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。29讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37综述钙离子通道TRPV5／TRPV6作用机理的研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯40致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．57中文摘要补肾活血固齿方对成骨细胞增殖、分化，酬P-2表达及TRPV5／TRPV6通道影响的实验研究摘要牙周炎是以牙周袋形成、袋壁炎症、牙槽骨吸收、牙齿松动为主要特征的口腔科常见病，多发病，牙周炎不仅导致成年人牙齿过早丧失，并可导致和诱发各种全身性疾病，严重影响健康。根治牙周炎的关键是通过成骨细胞和破骨细胞的调节作用阻止牙槽骨吸收或促进牙槽骨的再生。我科应用补肾活血固齿方治疗牙周炎，疗效显著，但其作用机理不明了。骨形成蛋

5、白(BoneMorphogeneticProteins，BMPs)是骨修复中最主要的诱导因子，有20多种亚型，其中BMP2的诱导成骨能力较为明显，BMP2通过Smads矛flp38MAPK信号通路促进成骨细胞表达多种特异性基因如I型胶原、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)、骨钙素，产生相应蛋白分泌到细胞外基质中，使细胞外基质矿化，进而完成成骨。钙离子通道TRPV5／TRPV6通过调节成骨细胞内钙离子含量的变化，激活p38MAPK通路，促进成骨细胞分化过程。ALP是成骨细胞早期分化的标志酶，它的活性可以代表成骨细胞的分化活性和

6、成骨细胞的分化水平。目的：补肾活血固齿方灌胃大鼠一周，取大鼠含药血清，作用小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3．E1细胞)，观察药物对MC3T3-E1细胞形态、增殖、ALP活性，BMP2表达及TRPV5／TRPV6通道的影响，探讨补肾活血固齿方成骨的作用机制。方法：1MC3T3一E1细胞的培养。2补肾活血固齿方按体表面积折算等效剂量灌胃大鼠，制备含药血清；等量生理盐水灌胃大鼠，制备无药血清作为对照组，10％胎牛血清为空白对照组。3用10％含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3．E1细胞48h、72h，倒置显微镜下观察补肾活血固齿方对MC3T3．E1

7、细胞形态的影响。4MTT法检测补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞增殖的影响。中文摘要lo％胎牛血清组、无药血清组、含药血清组(分别含有5％、10％、15％、20％含药血清)，分别培养MC3T3．E1细胞，MTT法检测12h、24h、36h、48h、60h、72h补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞增殖的影响。5检测补肾活血固齿方对MC3T3．E1细胞ALP活性的影响。10％含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞，检测24h、48h、72h时MC3T3一E1细胞中ALP的含量。6RT．PCR法检测补肾活血固齿方MC3T3．E1细胞B

8、MP一2及TRPV5／TRPV6mRNA表达影响。10％含药血清、无药血清培养MC3T3．E1细胞，RT．P