菝葜抗慢性盆腔炎有效部位及其化学成分研究

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文菝葜抗慢性盆腔炎有效部位及其化学成分研究studyontheAnti-chmnicPelVicInnammatoryDiseaseEffectiveFractionandItsChemicalCompositonof5■订Z‘Ⅸc^跏aL．课题来源：广东省医院药学研究基金(2014A14)学位申请人范银洲导师姓名谢扬教授专业名称药物化学培养类型学术型培养层次硕士研究生所在学院药学院答辩委员会主席答辩委员会委员雷林生教授万一千教授蒋晟教授陈卫民教授陈文华教授论文评阅人林敬明教授陈卫民教授2014年04月02日广州Ⅲ川㈣圳㈨l

2、IIIⅢ

3、圳川洲Y2618263硕士学位论文一1_菝葜抗慢性盆腔有效部位及其化学成分研究硕士研究生：范银洲指导教师：谢扬教授摘要菝葜(跏池r政协口L．)又名金刚藤，为百合科(Lillacaee)菝葜属的一种多年生落叶攀援灌木。根茎入药，为我国传统中药材，现收载于2010版《中国药典》。菝葜具有祛风利湿，解毒散瘀的功效，其中药制剂有金刚藤胶囊、金刚藤片剂等，临床主要用于治疗妇科炎症疾患，尤其在治疗慢性盆腔炎方面疗效确切。本论文是在活性追踪指导下对菝葜抗慢性盆腔炎有效部位及其化学成分开展研究，以期为菝葜的二次开发提供物质基础和质量保证。国内外有关菝葜生药学、化学成分、药理学及其临

4、床应用的相关文献报道表明，菝葜抗慢性盆腔炎的有效成分可能与菝葜黄酮类化合物及其皂苷类化合物有关，因此，本研究采用系统溶剂法，依次得到三个提取部位，分别为乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水液部位，然后通过大鼠慢性盆腔炎模型来评价菝葜三个提取部位抗盆腔炎的活性作用。具体实验过程为：将O，06mL25％苯酚胶浆注入大鼠右侧子宫，造成大鼠慢性盆腔炎(CPID)模型，观察菝葜各提取部位高、中、低(相当于临床等效剂量的4、2、1倍)三个剂量对CPID模型大鼠血液流变学的影响，探讨菝葜各提取部位对cPID的治疗作用。结果如下，菝葜乙酸乙酯部位的高、中剂量组能非常显著地降低CPID模型大

5、鼠增高的血液流变学指标(P

6、率的四个主要因素，尤其是乙醇浓度的影响最大。然后采用正交设计实验，以菝葜中三个主要的黄酮化合物落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素．3．O．o【一L一吡喃鼠李糖苷的含量为考察指标，对菝葜总黄酮的提取工艺进行优化。结合药效学实验结果，最终确定提取工艺为：提取溶剂为70％乙醇；乙醇用量为1埏药材加乙醇10L；提取2次：提取时间分别为2h、2h。验证实验表明，该提取工艺稳定、可靠，可用于后续菝葜总黄酮的提取。经上述提取工艺得到的菝葜总黄酮为粗品，各类杂质较多，必须进行纯化。为此，本研究通过对多种吸附树脂的静态吸附和动态吸附的考察来筛选适用于纯化菝葜总黄酮粗品的吸附树脂，结果表明

7、，聚酰胺(PA)适用于纯化菝葜总黄酮，并对其纯化总黄酮的相关工艺参数进行了考察，如上样浓度、上样量、乙醇浓度、乙醇洗脱剂用量、洗脱剂洗脱速度。实验中采用紫外可见分光光度法，以从菝葜活性部位中分离得到的一个含量最高的黄酮类化合物落新妇苷为对照品，以洗脱的总黄酮质量和纯度为考察指标，进行了纯化工艺优化。结果表明，选择菝葜总黄酮水溶液上样，其浓度相当于0．25g生药·mL一，选择80—100目聚酰胺，药液上样后预吸附2h，用水洗脱6BV，15％乙醇洗脱5BV，弃掉洗脱液，然后用50％乙醇洗脱7BV，收集50％乙醇洗脱液，回收乙醇，水液冷冻干燥得菝葜总黄酮样品。纯化后的总黄

8、酮的含量由菝葜乙醇提取液的16％提高到51％，表明该纯化工艺稳定可靠，可用于菝葜总黄酮的纯化。经药理活性研究实验证实，纯化后菝葜总黄酮具有显著的抗慢性盆腔炎作用，据此得到了菝葜抗慢性盆腔炎的有效部位。为了进一步明确菝葜抗慢性盆腔炎的有效成分，本研究对菝葜总黄酮活性硕士学位论文部位进行化学成分分离，得到一些单体化合物，为菝葜抗慢性盆腔炎的有效部位药效学研究奠定了物质基础。分离过程中首先以硅胶柱层析法进行粗分，以不同比例的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，得到不同极性的洗脱物：然后采用高速逆流色谱法(HSCCC)进行细分，具体实验条件如下：正己烷．乙酸乙酯-甲醇