菝葜治疗慢性盆腔炎的活性部位筛选及作用机制研究 (1)

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1、南方医科大学2010级博士学位论文菝葜治疗慢性盆腔炎的活性部位筛选及作用机制研究ScreeningofBioactiveFractionfromSmilaxchinaLforCPIDandStudyontheUnderlyingMechanismofActionthereof课题来源：自选课题学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院马云侯连兵药理学学术型博士药学院2013年5月13日广州博士学位论文麴Y2406磐Ill一菝葜治疗慢性盆腔炎的活性部位筛选及作用机制研究博士研究生：马云指导教师：侯连兵

2、摘要课题背景和目的慢性盆腔炎疾病(CPID)系指女性内生殖器官、周围结缔组织及盆腔腹膜发生慢性炎症所致。可由急性盆腔炎(PID)治疗不彻底转变而成，这是CPID发病的主要原因；亦可因体质较强，或感邪较轻，受病后表现为症状较轻，病势较缓的慢性盆腔炎【11。据美国疾病控制和预防中心调查，美国每年150多万妇女患PID，住院费用达10．6亿美元左右，并且每年有上百的PID患者死于并发症。在美国青少年PID感染率比成年妇女高，15～24岁妇女是该疾病高发人群，以美国黑人和拉美裔女性较为常见12】。据世界卫生组织估计

3、，传播疾病泛滥导致全世界每年新增3亿3千多万性病患者，其中有100／0-20％将发展成为CPID[31。在我国，由于个人卫生条件及医疗条件的限制，或在妇科小手术和计划生育手术中无菌操作不当，加之广泛应用宫内节育器时患者不注意个人卫生等原因，使盆腔炎的发病率逐年提高。同时随着性病在我国的发病率呈逐年升高趋势，由此引起的盆腔炎也在增多。由于抗生素及手术治疗CPID有许多弊端，中药治疗已日益成为治疗CPID的研究热点。大量文献报道盆益康合剂H、黄芪注射液[51等均能表现出既抗炎、又不易耐药的良好特性，且具有用药安

4、全有效、副作用小、费用较低等优点。金刚藤为菝葜的根部，为传统活血化瘀中药，市售金刚藤胶囊(菝葜提取物)己销售十余年，用于治疗CPID疗效显著，但其制剂较粗、药效机理也未能得很好的阐明。因此，进一步开发菝葜单味药制备成有效部位，并探讨其抗炎及免摘要疫调节作用等与其治疗作用相关的机制具有较高的学术价值和实用临床意义。本课题通过观察小鼠耳肿胀、大鼠棉球肉芽肿及大鼠慢性盆腔炎疾病(CPID)模型中小鼠耳肿胀度、大鼠棉球肉芽肿抑制率、CPID动物血液学指标及病理改变，对菝葜醇提物及其3个化学部位，即：乙酸乙酯部位、正

5、丁醇部位和水溶液部位的抗炎及抗CPID活性作用进行了比较和筛选，以确定其抗炎和抗CPID的活性部位，并通过柱分离对该部位做进一步的分离纯化，采用HPLC检测其含量对其进行质量评价。在获得了药效确切的活性部位后，亦通过观察其对CPID模型大鼠血清、子宫组织中炎症细胞因子、粘连相关指标的影响，探讨该活性部位对CPID的抗炎、抗粘连的免疫调节机制。本研究力图对菝葜的抗炎及抗CPID的有效物质进行富集，并阐明其药理活性和作用机制，有助于获得药效物质相对明确、药理活性相对特异的菝葜活性部位，为进一步开发菝葜抗CPID

6、有效部位甚至单体化合物制剂提供科学依据。课题实验方法和结果1、菝葜的提取分离：采用正交设计L9(34)表，以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间为考察因素，以HPLC色谱测定落新妇苷及黄杞苷的含量为考察指标，对菝葜的提取方法进行筛选，并确定菝葜最佳提取工艺。落新妇苷及黄杞苷的含量测定条件为：HypersilODSC18色谱柱；流动相：乙腈：0．04％磷酸水；检测波长均为290nm；柱温：室温；流速：0．7ml·min一。对正交试验所得各工艺样品的落新妇苷和黄杞苷含量分别进行方差分析，结果显示：乙醇浓度对实验结果有显

7、著性影响，其余各因素水平对实验结果的影响均无显著性差异(P>0．05)。随后采用综合平衡法对实验结果进行直观分析，得到菝葜最佳提取工艺为：将菝葜饮片粉碎成小颗粒状，加70％乙醇按乙醇：水为1：8、1：5、1：5提取3次，提取时间分别为2h、2h、1h。提取液过滤后，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇昧，置于冰箱中冷藏12h，取出药液，抽滤，合并滤液，加水定容即得，用于后续的研究。博士学位论文2、菝葜提取液3个化学部位的制备：采用液液萃取方法进行，以乙酸乙酯对提取液萃取得到乙酸乙酯部位，萃取后的药液再以正丁醇萃取得

8、到正丁醇部位，剩下的药液为水溶液部位。乙酸乙酯和正丁醇萃取均采用水饱和的乙酸乙酯和水饱和的正丁醇，按体积比1：1萃取至基本呈无色。采用25％苯酚胶浆0．06ml注入大鼠右侧子宫制备大鼠CPID模型，观察菝葜醇提物及3个化学部位高、中、低(相当于临床等效剂量的4、2、1倍)剂量组对CPID模型大鼠血液学及组织病理形态学改变的影响，探讨其对CPID的治疗作用；采用二甲苯致小鼠耳肿胀法，观察菝葜醇提物及3个化学部位高、