马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究

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1、马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究作者：陈丽花,李志军,王定勇【摘要】　　目的研究马鞭草(VerbenaofficinalisL.)抗乙肝有效部位的化学成分。方法采用柱层析和薄层层析分离马鞭草有效部位中的化学成分;用IR、ESIMS、1HNMR、13CNMR等波谱技术鉴定结构。结果分离并鉴定了6个化合物，分别为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)。结论首次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3、6为首次从该植物中分离得到。【关键词】马鞭草

2、杨梅素抗乙肝作用　Abstract:ObjectiveTostudythechemicalconstituentsintheantiHBVactivefractionofVerbenaofficinalis.MethodsTheconstituentsnchromatographyandthinlayerchromatography,andthEirstructurestheeffectivefractionofVerbenaofficinalis:kaempferol(1),querceti

3、n(2),myricetin(3),ursolicacid(4),verbenalin(5)andmyricetrin(6).ConclusionsChemicalconstituentsintheantiHBVactivefractionofVerbenaofficinalisthisplantforthefirsttime.　　Keyicalconstituents;myricetin;antihepatitisBvirus　　马鞭草(VerbenaofficinalisL.)为马鞭草科

4、(Verbenaceae)多年生草本植物，始载于《名医别录》，民间以其全草或带根全草入药。马鞭草作为传统中药，具有清热解毒、消肿利尿、活血通经等功效，广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等证[1]。现代研究表明，马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(HBV)和HBsAg，并能抗乙肝纤维化[2-3]。利用酶联免疫吸附检测(ELISA)技术[4]，作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位。为阐明其药效物质基础，本文对该有效部位进行系统的化学成分研究，从中分离得到6个化合物，分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨

5、梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)，其中化合物3和6为首次从该植物中分离得到。　　1仪器与材料　　熔点用XRC1显微熔点仪(四川大学科仪厂制造)测定,温度计未校正;红外光谱用NicoletPROTG460光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用BrukerAM500型核磁共振仪测定,TMS为内标;ESIMS在HP1100LC/MS上测定。柱色谱用硅胶(200～300目)、薄层色谱用硅胶(10～40μm)均为青岛海洋化工厂生产，SephadexLH20为美国GE公司产品

6、，ODS为日本YMC产品。马鞭草于2008年8月采自广东省广州市，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(VerbenaofficinalisL.)。　　2提取与分离　　取阴干的马鞭草10kg，粉碎至约60目，用适量甲醇室温浸泡3次,每次7d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280g。取该提取物250g分散于适量热水中再转移至2500mL分液漏斗,依次用石油醚、CHCl3萃取3次(每次用1000mL溶剂)，除掉极性小的化学成分,再用EtOAc萃取3次(每次用1000mL),

7、减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35g。ELISA法检测结果表明乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位[4]。有效部位经硅胶柱层析(200～300目)，三氯甲烷甲醇系统(体积比20∶1～0∶1)梯度洗脱。TLC检测，合并相同组分，共得到7个部分;各部分再经SephadexLH20柱层析[洗脱剂为甲醇水(体积比3∶2)]、ODS柱层析[洗脱剂为乙腈水(体积比1∶1)]、制备薄层层析(展开剂为氯仿甲醇体系)等反复分离纯化，得到化合物1(20mg)、2(38mg)、3(15mg)

8、、4(30mg)、5(55mg)和6(10mg)。　　3结构鉴定　　化合物1：黄色粉末，mp275.0～276.5℃。HClMg试验显阳性。ESIMS(m/z):287.0[M+H]+。1HNMR(500MHz,DMSOd6)δ:12.18(1H,s,5OH),8.15(2H,d,J=8.5Hz,H2′,6′),7.02(2H,d,J=8.5Hz,H3′,5′),6.55(1H,d,J=2.0Hz,H8),6.27(1H,J=2.0Hz,H6)。13CNMR(125MHz,D