芍药甙促小鼠皮层神经元活性及存活的体外研究

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1、第四军医大学硕士学位论文芍药甙促小鼠皮层神经元活性及存活的体外研究姓名：吴玉梅申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：鞠躬20020101；]；川军医人学颅I．川宄生毕业学位论史英文缩略词表英文缩写英文全称PFCNSDMEMDFl2PBSMTTODFCSKAEDTANGFNMDADMSOPaeoninorinCentralNervousSystemDubecco’sModmedEagle’sMediumDMEM佰12PhospateBu仃eredSaline3一【4，5一dimethyl一thiazol·2·y1]-2，5·diphemylt

2、eOpticalDensityValueFetalCalfSerumKanicAcidEthylenediamineteraaceticAcidNerveGrowIhFactorN—methyl—D—aspartateDimethylsuphoxide芍药甙促小鼠皮层神经元活性及存活的体外研究硕士研究生吴玉梅导师鞠躬教授辅导老师许汉鹏博士(第四军医大学神经科学研究所西安7i0032)摘要本课题主要通过体外细胞培养技术，观察了中药芍药的单体成份芍药甙(Paeoninorin，PF)对神经细胞的作用，为探索其治疗中枢神经系统损伤的作用机理打下初步的实

3、验基础。本实验主要分为三部分：第一部分：体外PF对小鼠皮层神经元活性的影响。采用体外神经细胞培养的方法，对胚胎小鼠(E5)大脑皮层的神经细胞进行有血清和无血清原代培养，以MTT法观察芍药甙(PF)对神经细胞活性的影响，并运用相差显微镜和免疫细胞化学技术对药物作用自“后的细胞进行形态学观察。结果表明：中药芍药的单体成分芍药甙可明显促进大脑皮层神经元的活性，并呈现一定的量效关系，PF促进神经元活性作用不依赖第¨U掣f页人学倾J’1'J『冗生毕业学位论史于血清；且在41．6mg·L“冰度时，pF促进神经元活性的作用最强(与对照组相比，P<0．01)。第

4、二部分：PF对体外培养大鼠星形胶质细胞活性的作用。本实验的目的是探讨PF是否通过增强星形胶质细胞活性增加PF神经营养作用的可能性。采片j星形胶质细胞体外培养的方法，利用新生sD大鼠(P：)大脑皮层星形胶质细胞进行原代培养，7d后纯化，传代后的胶质细胞分别进行有血清和无血清培养。以MTT法观察PF对星形胶质细胞活性的影响，运用相差显微镜及免疫细胞化学的方法对药物作用自U后的胶质细胞进行形态学观察。结果表明：(1)PF对星形胶质细胞活性有明显的抑制作用，PF不同浓度组星形胶质细胞活性均低于对照组(P<0．叭)，并呈现出一定的量效关系。(2)PF对星形

5、胶质细胞活性的抑制作用不依赖于血清。第一、二部分推论：体外PF促进神经细胞活性的作用是一种直接的作用，而不是通过胶质细胞l刈接影响神经细胞。第三部分：芍药甙对丁F常及受损培养小鼠皮层神经元的保护作用。将胚胎15d小鼠大脑皮层神经细胞以有血清方式分散接种于24孔板中，加入实验一确定的最佳促神经细胞活性的PF浓度。实验组加入兴奋性毒剂海人藻酸(KA)，用台盼蓝染色，计数存活细胞．同时运用相差显微镜及免疫细胞化学方法进行形念学观察。结果表明：(1)PF在20．8和41．6mgL。可延长药物作用组神经细胞存活时问，且细胞死亡率低于不加药物组。(2)加入兴

6、奋性氨基酸KA50“molL“作用30min，导致明显的神经元损伤，具体表骗JU4三队人’}坝hJh[生毕业孕他论上现为：神经元肿胀，失去折)匕‘陆．咳偏他，大量细胞死亡。Tm先加入PF208和41．6mg-L。‘培养4d，lzr对抗KA所致的神经损伤。结论：PF可延长}ll经细川乜存活时删及对抗KA所致的兴奋性神经损伤。关键词：芍药甙人鼠小鼠皮层州经元海人藻酸存河自0忸培养第¨U苹k人学坝㈠·¨‘生忸止学位论艾TheEf

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