查尔酮类化合物的抗氧化活性及其初步机制研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：查尔酮类化合物的抗氧化活性及其初步机制研究答辩委员会主席：梁米芳研究员(中国疾控中心)答辩委员会成员：叶发青教授(温州医科大学)董建勇教授(温州医科大学)陶正明副研究员(浙江省亚热带作物研究所)王朝杰副教授(温州医科大学)论文答辩日期：2014年5月24日万方数据温州医科大学硕士学位论文目录缩词简表．．．．．⋯．．．⋯．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯3中文摘要．．．．⋯．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．⋯．．．．．．⋯．．．．⋯．．．4引言．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯9

2、1．材料与方法⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯⋯．．111．1实验试剂．．．．．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯．111．2实验仪器⋯．．．⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯．．111．3实验方法．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．122．实验结果．．⋯．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．⋯．162．1抗氧化活性的筛选⋯⋯，⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．182．2抗氧化活性的初步机制研究⋯⋯．．．．．．⋯⋯．．⋯．．253．分析与讨论⋯⋯．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．⋯．．423．1抗氧化活性的筛选．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．423．2抗氧化活

3、性的初步机制研究⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．⋯．．434．小结．．．．．．．．⋯．．．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．．．．⋯⋯⋯⋯．45参考文献．．．．．．．．．．．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯．．．46附录．．．．⋯．．．．．．⋯．．．．．．．．．⋯⋯．’．．．．⋯⋯．⋯．．49致谢．．．．．．⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯．．50述．．．．．⋯．．．．．．．．．．⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．．．51参考文献．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．．⋯⋯．．．．．⋯．．⋯．．59独创性声明．．⋯．．．．．⋯．．．⋯．⋯．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．⋯

4、622万方数据温州医科大学硕士学位论文缩词简表3万方数据温州医科大学硕士学位论文查尔酮类化合物的抗氧化活性及其初步机制研究中文摘要目的：将一系列合成的新型查尔酮类化合物，通过l，1．二苯基．2．三硝基苦肼(1，1-Diphenyl一2-picrylhydrazylradical，DPPH)实验和对过氧化氢(H202)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PCI2)损伤的抗氧化活性的筛选实验，选出活性较好的化合物，研究其对细胞Nrf2／ARE抗氧化信号通路的影响和对H202诱导细胞损伤的保护机制。方法：选择本课题组在前期设计合成的三类查尔酮类化合物

5、：查尔酮(L类)、螺杂环类查尔酮(D类)和酰基化查尔酮(X类)，用DPPH清除率实验检测其对自由基的清除活性；建立H202诱导PCI2细胞损伤模型，用3．(4，5．二甲基噻唑．2)．2，5．二苯基四氮唑溴盐(MTT)法筛选化合物的抗氧化活性及检测活性化合物的细胞毒性；选择活性化合物，用real-timePCR法检测化合物对NF．E2相关因子2(Nr亿)的调控基因谷氨酰半胱氨酸连接酶亚基(GCLC)、血红素加氧酶l(HO．1)mRNA表达的影响；用Westernblot法检测化合物对Nrt2调控基因HO．1、GCLC的转录蛋白的作用；用Hoe

6、chst染色检测其对H202诱导的PCI2细胞凋亡的保护作用；用MTT法检测不同浓度的化合物对H202诱导的细胞生存率的作用以及HO．1的抑制剂与GCLC的抑制剂对H202损伤的细胞生存率的影响。结果：1、苯环具有3，4-OH取代的查尔酮类化合物对DPPH有较高的自由基清除活性。2、化合物对H202诱导的细胞损伤保护作用的筛选实验中，三类化合物在lOgmol／L(州)浓度下提前给药l小时(h)或24h，再经H202损伤后，细胞的生存率都出现不同的变化：L类化合物孵育1h时，苯环上有邻二羟基的化合物能明显提高细胞的生存率：孵育24h，苯环的b

7、环上有邻二羟基的化合物能提高细胞的生存率，而a环上有邻二羟基的普遍没有提高细胞生存率的作用。D类化合物孵育1h时，苯环上有邻二羟基的化合物能提高细胞的生存率；孵育24h，有邻二羟基的同样具有很好的活性，一部分无邻二羟基的化合物也具有很好的活性。X类化合物孵育1h时，并不能提高细胞的生存率；但孵育24h后，化合物普遍对细胞表现出了较好的保护作用。4万方数据温州医科大学硕士学位论文3、所有的活性化合物在浓度为101止VI时对细胞都无毒性。4、直接中和自由基的抗氧化作用机制：L4123作为L类化合物中a环有邻二羟基的代表化合物，能浓度依赖性地提高

8、经H202诱导损伤的细胞的生存率，并降低细胞内MDA的水平，同时L4123也能降低凋亡蛋白cleavedCaspase·3的表达，升高抗凋亡蛋白Bcl．2的表达，从而减少凋亡细胞