原发性肝癌组织中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶与抗酒石酸酸性磷酸酶的表达及其临床病理意义

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1、硕十学位论文第一章材料和方法2．切片常规脱蜡水化：将已在70"C烤箱中烤过的石蜡切片浸于二甲苯中10分钟×3次。取出切片置于100％无水乙醇中2分钟×1次；依次置入95％和80％酒精中各2分钟，取出置于蒸馏水中。3．ChemMateTMEnVision+／HRM附山，鼠二步法染色：1)取出蒸馏水中的切片，甩掉并擦干切片上组织周围的液体，平放于湿盒中，滴加过氧化物酶阻断剂(3％过氧化氢)，于组织上避光孵育10分钟，用蒸馏水冲洗。2)将切片置入EDTA消化液(0．125％，pH9．0)15分钟，先后用自来水、蒸馏水冲洗。再将切片

2、置入0．01mol／LPBS缓冲液(pH7．4)中，浸泡5分钟×3次。取出切片，甩掉并擦干组织周围的液体(组织切勿干燥)，平放于湿盒中。3)滴加50微升一抗工作液于组织上，室温孵育60分钟。用0．Olmol／LPBS缓冲液(pH7．4)浸泡切片5分钟×3次。取出切片，甩掉并擦干组织周围的液体(组织切勿干燥)，平放于湿盒中。4)滴加50微升A液(ChemMateTMEnVision+／HRP)于组织上，室温孵育30分钟。用0．01mol／LPBS缓冲液(pH7．4)浸泡切片5分钟×3次。取出切片，甩掉并擦干组织周围的液体(组织

3、切勿干燥)，平放于湿盒中。5)滴加预备好的显色剂DAB工作液50微升，室温孵育15分钟，或光镜下控制显色。显色完全后，用蒸馏水冲洗终止显色。6)苏木精复染1分钟，自来水冲洗15分钟。7)各级酒精(80％，95％，100％)脱水，每级2分钟。取出切片置入二甲苯中透明10分钟。8)用中性树胶封片。1．4PARP幂IITRAP表达阳性对照及评判结果以试剂盒中阳性切片作为染色的阳性对照，以PBS液(pn7．4)替代一抗作为染色的阴性对照。结果判断：细胞浆或(和)细胞核中含黄色至棕黄色颗粒者为阳性细胞。分别计数10个高倍镜视野下的阳性

4、细胞，根据染色强度评分(无，0分；弱，1分；中，2乡ff,强，3分)和表达阳性率评分(<5％，0分；5％～10％，1分；11％--20％，2分；21％"50％，3分；>50％，4分)之和为该病例表达评分，将评3硕十学f{7：论文第一章材料和方法分0"-'2分定为阴性病例，≥3分定为阳性病例。1．5统计学处理将所得数据输入SPSSll．5统计软件包进行f检验、妒检验和，Fisher’s精确概率法g：Spearman’s等级资料相关分析。检验水准a=O．05。4硕士学何论文第二章结果2．1PARP禾nTRAP在PHC中的表达PA

5、RP和TRAP在癌组织和癌旁组织均有表达。PARP免疫反应物主要定位于肿瘤细胞胞核，多靠近核膜(见图1、2)；TRAP免疫反应物主要定位于癌细胞胞浆(见图3、4)。PARP和TRAP在PHC癌组织中的表达阳性率(58．14％，41．86％)和表达评分(2．23±2．07’1．58+1．97)均高于癌旁组织的表达阳性率(11．11％，3．70％)和表达评分(o．33_-"0．96，0．15±O．77),x及j-E常组织的表达阳性率和表达评分(均为0)。差异有统计学意义(P<0．05)。见表1。2．2姗和TRAP的表达与PHC临

6、床病理特征之间的关系由表2可见，PARP在癌组织中的表达情况与PHC的临床病理特征未见明显关系。由表3可见，TRAP在癌组织中的表达情况与PHC的临床病理特征未见明显关系。2．3姗和础在PHC癌组织中表达的相互关系经相关性分析结果显示，PHC癌组织*PARP和TRAP的表达评分之间呈正相关(，=0．429，P<0．05)口5硕十学位论文第二章结果表1PARP和TRAP在癌组织，癌旁组织和正常组织中的表达情况与癌组织相比，·表示P<0．05表2PARP在肝癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系6硕七学位论文第二章结果表3TRA

7、P在肝癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系7硕I：学位论文第二章结果图1：PARPI‘n性表达，评分4分，PHC，EnVisionTM免疫组化法，x200-善～■l嘶图2：PARP阳性表达，评分3分，癌旁组织，EnVisionTM免疫组化法，×2008硕士学位论文第，．：章结果图3：TRAP阳性表达，评分5分，PIIC，EnVision刑免疫组化法，x200图4：TRAP『【U性表达，评分4分，癌旁组织，EnVision刑免疫组化法，x2009硕士学位论文第三章讨论4．1肝癌研究现状肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，自90年代

8、以来肝癌的年死亡率已上升为城市和农村恶性肿瘤死亡率的第二和第一位。全世界每年新发病的肝癌约45％在我严，国大陆，尤以东南沿海区域高发的趋势更为严峻。目前肝癌的治疗仍以手术为首选的治疗方案，但手术切除的突出问题是术后复发率高，手术切除率低，绝大多数患者在确诊时已属临床中晚期，失去了手术治疗的