汉族人群聚腺苷二磷酸核糖聚合酶

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1、汉族人群聚腺苷二磷酸核糖聚合酶：梁海荣，唐焕文，胡大林，庄志雄【关键词】苷二磷酸核【摘要】目的：通过检测人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（hPARP1）7个外显子核苷酸多态性，了解在广东的汉族人群中hPARP1基因多态性分布，为建立民族特色的DNA修复基因多态性数据提供基础资料。方法：选取在广东地区的汉族健康人群320名的基础资料及血液样本，抽提血液DNA，用PCR法扩增hPARP1基因7个外显子，采用聚合酶链式反应（PCR）单链构象多态性(SSCP)和银染技术检测hPARP1基因多态性，并进行DNA序列测定。结果：在广东的汉族正常人320名血标本的7个外显子扩增产物SSCP电泳条

2、带中，4个样本hPARP1基因外显子17的SSCP电泳条带检出1条多态性条带，3个样本第12内含子检出1条多态性条带，其余6个外显子扩增产物SSCP电泳未见多态性条带。正常带型DNA测序结果与genebank中已知序列完全一致，第17外显子上有1种基因突变类型（T→C）。结论：在广东地区的汉族人群的hPARP1基因第17外显子和第12内含子上可能存在多态性。【关键词】聚腺苷二磷酸核糖聚合酶－1；遗传多态性；聚合酶链反应【Abstract】Objective:Toinvestigatethenucleotidepolymorphismsanddistributionsofsev

3、enexonsinhumanpoly(ADPribose)polymerase1(PARP1)geneandtocontributetotheconstructionofthespecialDNArepairgenepolymorphismsdatabank.Methods:Thebasicmaterialsandbloodsamplesfrom320GuangdonghealthHanpopulationorphismofexon3,11,12,13,16,17andexon20ofhPARP1geneed.Results:Apolymorphismsofexon20ofP

4、ARP1genealbandstheanalysisofPCRSSCPinotherexons.Also,DNAsequenceofnormalbandsturnedoutthatPCRproductsutations(T→C)and(G→A)orphismsmayexistinexon17andintron12ofhPARP1geneinGuangdongHanpopulation.PCRSSCPsilverstainingcouldbeasatooltoscreenrapidlythepolymorphismshPARP1gene.【Keyerase1;geicpolym

5、orphism;polymerasechainreactionDNA修复系统在修复DNA损伤、维持基因组完整和稳定性中起着不容忽视的作用。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1［poly(ADPribose)polymerase1，PARP1］是真核细胞中存在的一种蛋白质翻译后修饰酶。可参与许多与细胞功能有关的重要反应，并与癌症的发生、发展和治疗、预后密切相关，对维持DNA的完整性方面起着重要的作用［1］，其多态位点的确认对疾病易感性的流行病学研究具有重大意义。基因检测能有效筛查基因突变携带者，可以为进一步鉴定该突变功能上的意义提供基础的分子遗传学资料，因而具有重要的意义。本文应用PCRS

6、SCP基因筛查技术和分子流行病学方法检测了在广东的汉族人群中正常人hPARP1基因的多态性，为hPARP1基因多态性人群分布和建立民族特色的DNA修复基因多态性数据库提供基础资料。现将结果报道如下。1方法1.1样本收集选取在广东地区的健康状况良好(通过体检选择取)、无家族史和遗传病史、三代及以上均为汉族的320名个体（其中男174例，女146例，年龄38～67岁，平均年龄（43.15±6.70）岁）并取血样标本。1.2血液DNA的抽提［2］采集外周抗凝全血5mL，用经典酚氯仿法提取外周血DNA，并在4℃保存。1.3引物设计根据已确定的hPARP1基因cDNA和内含子/外显子连

7、接序列，用PrimerPremier5.0引物设计软件设计hPARP1基因7个外显子的引物，该引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成(表1)。表1扩增hPARP1基因外显子的引物序列　1.4PCR扩增PCR反应总体积为25μL，各成分终浓度为：引物0.125μmol/L，dNTP0.2mmol/L，Mg2+1.8mmol/L，DNA模板25～250ng，TaqDNA聚合酶2.5u。反应参数为：98　℃预变性5min，94℃30　s，53～59℃30　s，72℃45　s，30次循环后72℃延伸8min