一种免标记检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1活性的新方法.pdf

《一种免标记检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1活性的新方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn一种免标记检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶#-1活性的新方法**罗超，李代琦，黄燕5（湖南大学化学化工学院,长沙,410082）摘要：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）在基因修复、DNA复制和转录调控等方面起到非常关键的作用。开发准确、灵敏检测PARP活性及筛选潜在抑制剂的方法在生化研究和药物开发中是至关重要的。本文中，发展了一个基于超电荷绿色荧光蛋白（ScGFP）/氧化石墨烯传感平台的免标记检测PARP-1活性的新方法。ScGFP与GO之间的静电作用及疏水作用10导致ScGFP的荧光被高效猝灭。PARP

2、-1催化的聚腺苷二磷酸核糖化后的产物聚腺苷二磷酸核糖（PAR）带大量负电荷，能与ScGFP形成ScGFP/PAR纳米复合物，从而有效保护ScGFP荧光不被GO淬灭。研究结果表明，该方法能够灵敏、选择地检测PARP-1，该方法的线性范围为0.2-7U/mL，检测限为0.06U/mL。此外，该方法也能用于PRAP-1抑制剂筛选，并以苯甲酰胺和AG-14361为研究对象。15关键词：分析化学；聚腺苷二磷酸核糖聚合酶；超电荷荧光蛋白；氧化石墨烯；抑制剂中图分类号：O657Alabel-freeassayforthedetectionofpoly(ADP-ribose)

3、polymerase-1activity20LUOChao,LIDaiqi,HUANGYan(CollegeofChemistryandChemicalEngineering,HunanUniversity,Changsha,410082)Abstract:Poly(ADP-ribosyl)ation,catalyzedbypoly(ADP-ribose)polymerase(PARP),playskeyrolesingenomerepair,DNAreplication,andtheregulationoftranscription.Developmento

4、faccurateandsensitiveapproachesforPARPactivityassayandpotentialinhibitorsscreeningiscriticalfor25biochemicalinvestigationanddrugdiscovery.Inthiswork,alabel-freefluorescenceassaystrategyforthedetectionofPARP-1activitywasproposedbasedonthesuperchargedgreenfluorescentprotein(ScGFP)/gra

5、pheneoxide(GO)sensingplatform.ElectrostaticinteractionandhydrophobicinteractionbetweenScGFPandGOleadtoeffectivequenchingofthefluorescenceofScGFP.Negativelychargedpoly(ADP-ribose)polymer(PAR)generatedfromthepoly(ADP-ribosyl)ationcatalyzedbyPARP-1,30canbindScGFPthroughelectrostaticint

6、eractionandformtheScGFP/PARnanocomplex,whichprotectScGFPfrombeingquenchedbyGO,therebyresultinginaswitch-ondetectionofPARP-1activity.Undertheoptimizedconditions,theproposedassayiscapableofsensitivelyandselectivelymeasuringPARP-1intherangeof0.2-7U/mLwithadetectionlimitof0.06U/mL.Furth

7、ermore,thefeasibilityofthismethodforPRAP-1inhibitorsscreeningwasalsodemonstratedbyusingbenzamide35andAG-14361asmodels.Keywords:Analyticalchemistry;poly(ADP-ribose)polymerase-1;Superchargedgreenfluorescentprotein;Grapheneoxide;Inhibitor400引言聚腺苷二磷酸核糖化（PARylation）是由PARP催化引起的一种重要的蛋白质翻译后

8、修[1,2]饰过程，在细胞生理学及基因