后天感染河南麻鸭乙肝病毒模型的建立及新型核苷-联苯双酯化合物α-ddb-du抗hbv药效学研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEstablishmentofStandardizedDuckHepatitisBVirusModelusingDuckingofHenanProvinceandAnti·hepatitisBVirusActivityof仅一DDB—DU，anovelNucleoside-biphenyldicarboxylateCompound／nVitroand／nHvoByLiminZangSupervisor：Pr

2、of．LiyunZhengPharmacologySchoolofpharmaceuticalSciencesMay2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留

3、、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日中文摘要后天感染河南麻鸭乙肝病毒模型的建立及新型核苷．联苯双酯化合物仅．DDB-DU抗HBV药效学研究河南研究生：臧利敏导师：郑立运郑州大

4、学药学院乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HepatitisBvires，HBV)感染引起的一种常见的、严重的肝脏疾病。尽管一些抗病毒药物如拉米夫定(Lamivudine，3TC)、阿德福韦酯(Adefovir,ADV)等能够有效的抑制乙肝病毒复制，慢性乙肝仍然是一种无法彻底治愈的疾病。目前，在抗乙肝病毒治疗中核苷类药物起着关键作用。但是，长期使用会产生耐药和毒副作用，这可能导致治疗失败、肝脏疾病的发展。因此，寻找疗效显著、低毒副作用的新型抗HBV药物仍然具有重要意义。鸭乙型肝炎(DuckhepatitisBvires，DHB

5、V)模型是目前国内外公认的一种评价抗HBV药物的体内动物模型。本文首先建立了河南地区后天感染麻鸭乙肝病毒模型，然后采用HepG2．2．15细胞为体外模型，评价新型核苷类药物仪一DDB．DU的体外抗病毒活性：采用建立的鸭乙肝模型为体内模型，评价0c．DDB．DU的体内抗病毒活性及保肝作用。第一部分：后天感染河南麻鸭乙肝病毒模型的建立。目的：建立河南麻鸭乙型肝炎病毒标准模型，并初步观察拉米夫定(3TC)体内抗DHBV作用。方法：筛选3日龄DHBV阴性河南麻鸭，经胫静脉注射DHBV阳性血清，连续观察42天，采用荧光定量聚合酶

6、链式反应(fluorsescencequantitativepolymerasechainreaction，FQ．PCR)检测鸭血清和肝脏中DHBVDNA变化情况。随后用3TC对建立的模型进行初步应用。模型组给予生理盐水2ml／kg·d，3TC组给予3TC20mg／kg·d，连续给药lO天。FQ．PCR检测给药后5天、10天及停药后3天血中文摘要清和肝脏中DHBVDNA抑制率，并进行肝脏病理学观察。结果：感染2d后，血清和肝脏中均可检测到DHBVDNA。血清第14天达到高峰，肝脏第21天达到高峰，在42天内均维持较高的

7、DHBVDNA水平。3TC用药10天后，血清和肝脏HBVDNA抑制率分别为86．47％幂N84．92％，肝组织炎性病变较模型组明显减轻，但停药3天有轻度“反跳”现象。结论：河南麻鸭后天感染DHBV较敏感，病毒在体内增殖稳定，是DHBV感染的理想疾病模型，该模型可用于抗HBV药物的筛选和评价。第二部分：新型核苷一联苯双酯化合物a-DDB．DU抗HBV作用研究。目的：探讨新型核苷类化合物u．DDB．DU体内和体外抗乙肝病毒作用。方法：O【．DDB—DU体外抗病毒活性的研究选用能够合成、分泌HBV颗粒和表达HBV抗原标志物的

8、HepG2．2．15细胞株为模型，采用MTT法检测不同浓度0【．DDB．DU的细胞毒性；酶联免疫吸附法(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay，ELISA)检测不同浓度c【一DDB．DU对细胞上清中HBsAg和HBeAg的抑制作用；FQ—PCR法检测0【．DDB．DU对细胞内外HBVDNA水平的抑制作用。体内