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1、ISSN100727626中国生物化学与分子生物学报2008年8月CN1123870PQChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology24(8):767～774·技术与方法·双分子荧光互补技术1),2)2)2)3樊晋宇,崔宗强,张先恩(1)2)华中科技大学生命科学与技术学院,武汉430074;中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室,武汉430071)摘要双分子荧光互补(bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)是近年发展起来的用于体内或体外检测蛋白质相互作用的一项新技术.该技术是
2、将荧光蛋白在合适的位点切开形成不发荧光的2个片段,这2个片段借助融合于其上的目标蛋白的相互作用,彼此靠近,重新形成能具有活性的荧光蛋白.BiFC方法简单直观,既可以检测蛋白之间的相互作用,也可以定位相互作用蛋白质的位点.多色BiFC系统共用或与荧光共振能量转移(FRET)技术联用,还可以检测细胞内多个蛋白质的相互作用.关键词双分子荧光互补(BiFC);蛋白质相互作用;检测;定位中图分类号Q71;Q81BimolecularFluorescenceComplementationTechnique1),2)2)2)3FANJin2Yu,CUIZong2Qiang,ZHANGXian
3、2En(1)CollegeofLifeScienceandTechnology,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430074,China;2)StateKeyLaboratoryofVirology,WuhanInstituteofVirology,ChineseAcademyofSciences,Wuhan430071,China)AbstractBiomolecularfluorescencecomplementation(BiFC)isarecentlydevelopednewtechniquetodetectt
4、heprotein2proteininteractionsinvitroandinvivo.Thetechniqueisbasedontheprinciplethattwononfluorescentfragmentsofafluorescentproteindissectedatappropriatesitearebroughttogetherandreconstructedtofluorescence,dependingontheassociationorinteractionbetweentheproteinsfusedtoeachfragment.BiFCmethodn
5、otonlyenablesdirectlyvisualizationandlocalizationofproteininteractionsbutalsoissimpleandnoninvasive.Moreover,multiplecolorBiFCsystemsorcombingBiFCandfluorescenceresonanceenergytransfer(FRET)technologymaybeexploitedtodetectthemultipleprotein2proteininteractions.Keywordsbimolecularfluorescence
6、complementation(BiFC);protein2proteininteractions;visualization;localization细胞内蛋白质之间的相互作用或形成蛋白复合切开,形成不发荧光的N和C端2个多肽,称为N物在细胞的生命活动过程中起着重要的作用,研究片段(N2fragment)和C片段(C2fragment).这2个片段蛋白质的相互作用既广泛又活跃.研究手段也十分在细胞内共表达或体外混合时,不能自发地组装成[1]丰富,既有体外实验如免疫共沉淀、表面等离子共完整的荧光蛋白,在该荧光蛋白的激发光激发时不[2][3]能产生荧光.但是,当这2个荧光蛋白的片
7、段分别连振、蛋白质芯片等,也有体内实验如酵母双杂交[4]、荧光共振能量转移[5]、蛋白质片段互补等[6,7].接到1组有相互作用的目标蛋白上,在细胞内共表双分子荧光互补技术(bimolecularfluorescence收稿日期:2008201214;接受日期:2008203231complementation,BiFC)是近几年出现的一种新技术.中国科学院知识创新工程项目资助该技术简单直观,能够用于体内或体外蛋白质相互3联系人Fax:+862027287199492,E2mail:x.zh
