BIFCBimolecularFluorescenceComplementation双分子荧光互补系统

《BIFCBimolecularFluorescenceComplementation双分子荧光互补系统》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、BIFCBimolecularFluorescenceComplementationAlbaEspargaróColoméProteinFragmentComplementationTambéanomenats:Interactiontrapping.Permetenobservarinteraccióentreproteïnesinvivo.Classes:UbiquitinaDihidrofolatreductasaΒ-galactosidasaGFP(greenfluorescentprotein)Detectionoftransientprotein-pr

2、oteininteractionsbybimolecularfluorescencecomplementation:TheAbl-SH3caseM.Morelletal.Proteomics2007,7,1023-1036EstudiarendetalllahabilitatdelmètodeBIFCperdetectarinteraccionstransitòries.TheAbl-SH3caseDominiSH3:Dominiimplicatenlaregulaciónegativadel’activitatquinasamitjançantinteracci

3、onstransitòriesentreproteïnes.C-Abltyrosinekinase:reguladiferenciaciócel·lulariapoptosi,sentresponsabledemoltssenyalsextracel·lulars(factorsdecreixement,adhesiócel·lularicitoquines)iintracel·lulars(danyDNA,estrèsoxidatiu)InteraccionsestudiadesDominiSH3interaccionaambpolipèptidsricsenp

4、rolina,seguintelmotiuPXXP:BRCA1:càncerdemamatipus1PRDX1:peroxiredoxinap41:pèptidricenprolina+mutantsWT(Tyr4)Tyr4ArgTyr4PheTyr4TrpTyr4GlyBimolecularFluorescentComplementationC-Abl-SH3:fusionadaal’extremC-terminal(156-238)ambunlinkerdeseqüènciaSGGGSGGSiclonadaenpBAT-4(ampR)Pèptidp41:fus

5、ionatal’extremN-terminal(1-155)ambunlinkerdeseqüènciaSGGGSiclonatenpET28-a(+)(kanR)Transformaciódecèl·lulescompetentsd’EscherichiacoliBL21(D3)EsquemabasatenlesestructuresobtingudesperX-rayExperimentsambp41Cèl·lulestransformadesambp-Abl-SH3-CYFPop-p41-NYFPindividualment.Fragmentsindivi

6、dualsdeYFPnosónfuncionalsCèl·lulestransformadesambp-Abl-SH3-CYFPip-p41-NYFPLamajoriadelescèl·lulestenenfluorescència.Cèl·lulestransformadesambp-Abl-SH3-CYFPip-NYFPNecessitatdeduesproteïnesperlareconstituciódeYFPAnàlisidel'espectred’emissiódefluorescènciaons’observaelpica523nm,l’espect

7、recaracterísticdelaYFPnativaEstructuradeAbl-SH3interaccionantambP41Pro54iTrp36sóndosresidusmoltbenconservatseneldominiSH3,situatsenelcentrehidrofòbic.Jugaunpapermoltimportantenlainteraccióambelspèptidsricsenprolina.Pro54LeuredueixsignificativamentlauniódeldominiAbl-SH3ambelslligandsCo

8、ntras