用cdna微阵列研究内毒素休克小鼠肺组织基因表达谱的改变

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1、·"#*·生物化学与生物物理进展+,-./01-!234/01-5267/*##*；’8（-）用!"#$微阵列研究内毒素休克小鼠肺组织基因表达谱的改变袁开宇!）赵震宇!）刘瑛邹江刘梅冬陈广文尢家肖献忠!（中南大学湘雅医学院病理生理学教研室，长沙"!##$%）摘要利用&’()微阵列检测了小鼠内毒素休克*+及*#+肺组织基因表达谱的改变,发现内毒素休克*+有!*%个基因表达上调，-个基因下调；内毒素休克*#+有.!个基因表达上调，*!个下调,并用/0123/进一步验证了结果的可靠性,初步分析了基因表达谱改变的意义,有助于从基因组水平阐明内毒素休克的分子机制,关键词

2、基因表达谱，内毒素休克，肺，小鼠学科分类号/-4-败血症休克是常见危重病症，近年虽采用了强%材料与方法有力的抗生素及有效的支持治疗，其死亡率仍高达［!］-#5!4#5,%&%材料败血症休克的病理基础是全身性炎症反应综合G?L>／&小鼠购自北京医科大学动物中心；大征（67689:;&;<=>?::?8@A7A96B@<6967［*］，引起DE/D的最主要原因是革兰氏阴性购自美国NEG3I公司；’(?69$购自/@&+9公司；DE/D）菌胞壁上的内毒素，其主要成分为脂多糖（F2D）,&’()

3、微阵列膜（)8>?60OO@P69!Q*)AA?7R;8）购近年来的研究表明，F2D与血液中的F2D结合蛋自3>@<89&+公司；微阵列密度分析软件为本科室自白（FG2）结合，作用于单核细胞或多形核细胞膜行开发；23/引物由上海生工生物公司合成,受体3’!"，激活多种细胞内蛋白激酶系统，引起%&’内毒素休克模型的复制(H1"G及(H1EF14等转录因子活化，诱导0(H1#、G?>L／&小鼠均为雄性，体重!%!*"J,G?>L／&EF1!、EH(等促炎因子及EF1"、EF14、EF1!#、EF1小鼠经腹腔注射大肠杆菌内毒素（溶于生理盐水，［-，"］!!等抗炎因子

4、的转录明显增加,同时，在败血!.:J／SJ）后，观察$*+内死亡率，一部分小鼠症休克的发生发展中，一氧化氮（(I）、脂质介质于注射后*+及*#+摘取心、肝、肺、肾、脾、脑和热休克蛋白的产生也增多［.］和肌肉组织，用液氮快速冷冻后转至T%#U冰箱保,上述多种因子与靶细胞相互作用，使得败血症休克的病理生理机制存，对照组仅注射等量生理盐水,错综复杂，至今仍未完全阐明,以往的研究大多只%&()#$提取及去"#$消化处理针对单个或数个细胞因子、炎症介质及其细胞信号用0A;M@>抽提肺组织总/()，’(?69$消化去转导途径中某个环节，而忽略了多种炎症介质及信除J’()后

5、再用0A;M@>抽提总/()一次，用分光号转导途径的同时存在及相互作用,因此，过去经光度计测/()浓度及纯度,典的研究方法不利于全面系统地阐明败血症休克这%&*!"#$探针的标记与纯化样极其复杂的病理生理过程的发生机制［4］每样品取.总/()，加!:>&’()合成引,%J为了系统地了解败血症休克发生发展过程中多物（&’()67<8+96;6BA;:9A，3’D）（3>@<89&+公个基因的改变情况，我们利用&’()微阵列司），用C;98+7>B7A@&?AL@

6、3/仪中进行反应：$#U变性%>小鼠肺组织基因表达谱（J9<99KBA966;@9）*:;<，.#U复性*:;<；然后加入-Q.%>#1-*2C)02的变化，试图发现某些以前研究中未知的与败血症!通讯联系人,休克密切相关的基因及信号传导途径，以便进一步!）袁开宇和赵震宇并列为第一作者,阐明其发生机制，为其临床防治提供新的线索,09>：#$-!1"%#."W!，V1:?;>：K;?,&@:收稿日期：*##!1#W1!!，接受日期：*##!1!!1*%万方数据?!!?；+D（O）生物化学与生物物理进展)38.E:-

7、8逆转录?!(2-；再用+结果@$)-7.8A公司327中的纯化柱纯化探针B探针的放射性强度在C"D+’!#EF以上B+"!小鼠死亡率!"#杂交、洗膜及放射自显影E4W$

8、／8鼠腹腔注射大肠杆菌内毒素于标记探针