伪狂犬病毒沿神经元细胞轴突运输的初步研究

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1、分类号密级华中农业大学硕士学位论文伪狂犬病毒沿神经元细胞轴突运输的初步研究ThepreliminaryresearchaboutPseudorabiesvirusTransportingalongtheNeuronsAxon研究生：尹贻鑫学号：2010302110187指导教师：刘正飞教授指导小组：陈焕春院士金梅林教授何启盖教授专业：预防兽医研究方向：动物传染病获得学位名称：农学硕士获得学位时间：2013年6月华中农业大学动物医学院二O一三年六月华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学傍谂支否如需保密

2、，解密时间年月圜是否保密独创性声明111111111UllIIIlUIIIIIIIIIIY2394891本人声明所呈交纳论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成幕。零我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果：也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书两使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同Z-作的同志对本研究所做的任侮贡献均已在论文中徽了明确昀说明，并表示了谢意。醑究垒獭：尹，嬲鑫悯：砂‘多年们B翻学位论文使用授权书注：保密学位

3、论文(翱涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论粉沧娥者戳．彳忆瓜锄始徘≯歹·鹏锄纩卜7签名疆期：功眵年6月侈日签名日期：沙传年否月，；习诧：请蒋本表直接装订在学位论文的扉页和目录之问伪狂犬病毒沿神经元细胞轴突运输的初步研究目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．iAbstract．⋯⋯⋯．．⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯⋯⋯．⋯．⋯．⋯⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯iii缩略语表(Abbreviation)

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯vi第1章文章综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1弓I言：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1伪狂犬病毒流行病毒学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．j⋯⋯⋯．11．2伪狂犬病毒的分子生物学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．3伪狂犬病毒的轴突运输⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．4微流体系统⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6

5、1．5神经元分子筛⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．6研究的目的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第2章材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．1试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1O2．1．1病毒、细胞、菌种与质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．2实验仪器及耗材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．3酶及主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102

6、．1．4主要溶液及培养基的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．1．5抗体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．132．1．6本研究中所用的寡核苷酸引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．2试验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．152．2．1中间转移质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．2．2重组病毒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．2．3Westernblotting⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．2．4鸡胚背根神经节(DRG)外植体培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．2．5鸡胚背根神经节(DRG)细胞的原代培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．2．6盖玻片或培养皿的包被⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．2．7体外培养背根神经节细胞的间接免疫荧光检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．2．8微流体系统的组装及细胞培养和接毒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．2．9活细胞成像技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第3章结果和分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．273．1重组示踪病毒的构建与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27华中农业大学2013届硕士研究生学位论文3．1．1PRVgB—RFP重组示踪病毒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一273．1．2PRVVPl6．EGFP重组示踪病毒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293．1．3PRVEGFP．VPl／2重组示踪病毒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一333．1．4PRVEGFP