湖南省4株伪狂犬病毒的分离鉴定与培养高滴度伪狂犬病毒的研究

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1、＇．满？考《令硕±学位论文湖南省４株伪狂犬病毒的分窝鉴定与培养高滴度伪狂犬病毒的硏究研究生姓名杨涛涛指导教师余兴龙教授学科专业预防兽医学研究方向病原分子生物学与免疫学．義．；遽ＶＨＨ－：二０五年六月分类号Ｓ８５密级ＵＤＣ单位代码１０５３７闕斋农巫丈＃硕±学位论文湖南省４株伪狂犬病毒的分离鉴定与培养高滴度伪狂犬病毒的研究ＩｓｏｌａｔａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙｏｆｆｏｕｒＰＲＶｓｔｒａｉｎｓｆｒｏｍＨｕｎａｎＰｒｏｖ

2、ｉｎｃｅａｎｄｔｈｅｓｔｕｄｏｆｈｉｈｙｇｔｉｔｅｒＰＲＶｃｕｌｔｕｒｉｎｇ巧ｆ究生姓名杨涛涛指导教师余兴龙教授学科专业预防兽医学研究方向病原分子生物学与免疫学论义答辩日期２０１５．５．３１答辩委Ｓ会主席刘毅论文评阅人黎满香、何世成、刘道新二—０五年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含負他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或具它教育

3、机构的学位或证书而使用过的材料。一Ｆ了明确的说明并表示了谢意与我同工作的同志对本研究所做的ｆｌ可责献均已在论文中ｆ。＞々７；研究生签名：為吟时间７诊丰知Ｘ曰如关于论文使用授权的说明：学校有权保留送交论本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即、、文的复印件和电子稿，可采用影印缩印或扫描等复制手段保存，允许论文被查阅和借阅；。同＇传播学位论文的全部１：编学位论文意湖南农业大学可Ｌ义用不同方式在不同媒体上发表或部分内容，并同意将由此产生的收益捐赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。【保密

4、的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：时间年（＾月￥日导师签名：邮目年的主令必／广摘要摘要２０１２－２０１４年从湖南平江、巧罗、浏阳、长沙四地的四个规模猪场送检的病料－（脑组织）中检测到伪狂犬病毒（ＰＲＶ）野毒。将脑组织接种ＰＫ１５细胞，经ＰＣ民和动物接种鉴定为伪狂犬病毒－ＸｉａｎＡ、ＰＲＶ－－。４个毒株分别命名为ＰＲＶｇＧＡ、ＰＲＶＹＹ和ＰＲＶ－ＬＹ。本研４株ＰＲＶ的免疫（ｇＢＨ、ｌ、、）究通过对这、ｇＧ、ｇｇｇＬｇＭ与毒力相关基因（ｇＥ，、ＰＫ、ＴＫ）进行序列分析结果显示送４株ＰＲＶ的免

5、疫与毒力相－关基因核昔酸同源性在９９．８％１００％，说明分离得到的４株ＰＲＶ变异极小将这４株；ＰＲＶ与国内外的主要毒株进行序列比对，结果表明送４株ＰＲＶ与国内的分离毒株同－－ＢＪＹＴＴ．，源性很高，与株和Ｊ株的亲缘关系最近，为９９８％１００％说明当前国内流行的ＰＲＶ毒株变异较小。一对从湖南省分离得到的４株伪狂犬病毒进行毒价测定后，筛选出株培养滴度较－，ＰＲＶＹＹ株島的伪狂犬病毒即，该株伪狂犬病毒在ＭＤＢＫ细胞上的病毒滴度能够７＂达到１０ＴＣＩＤ５〇／〇．ｌｍＬ。通过建立ＭＤＢＫ单克隆细胞库，筛选出１株单克隆

6、细胞７＂－－ＭＤＢＢＣ１培养ＰＲＶＹＹ株的病毒滴度能够达到１０ＴＣＩＤ／Ｏ．ｌｍＬ，通过终点稀释法ｓｏ－－上进行传代－－将ＰＲＶＹＹ株在ＭＤＢＫ１，ＰＲＶＹＹ株在该株单克隆细胞ＭＤＢＫ１上的７５７６９２上－病毒滴度能够稳定在〇ｌｍＬ，ＰＲＶ０１ＴＣ阻５〇／〇．ＷＹＹ株的平均病毒滴度达到１－．ｌｍＬ２ＴＣＩＤｓｏ／Ｏ，ＰＲＶＹＹ株的病毒滴度在原有的基础上提离了约倍。这为制备伪狂犬病毒野外流行毒株灭活疫苗打下了良好的基础。关键词；ＰＲＶ；分离；鉴定；同源化病毒滴度；ＴＣＩＤｓｏＩ湖巧位论文

7、ＡｂｓｔｒａｃｔＦｏｕｒ－ｗｉｌｄｔｙｐｅｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｍｓＰＲＶｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｆｒｏｍｐｏｒｃｉｎｅｂｒａｉｎｐ（）ｔｉｉｓｓｕｅｓｗｈｉｃｈｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｆｂｕｒｆａｒｍｓｏｆＰｉ打ｉａｎ、ＭＵｕｏ、ＬｉｕｙａｎａｎｄＣｈａｎｓｈａｉｎ，ｇｊｇｇｇａｎｒｏｖｎｃｅｕｒ－ｒｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｏｌａｅｄｂｉｎｏｃｕｎＨｕｎｉｄｉｎ２０１２２０１４，ＴｈｅｆｏｕＰＲＶｓｉｓｔｙｌａｔｉｐｇｇ－ｏｉ打巧ｈｅｃｅｌ

8、ｓｉｅｎｉｆｉｅｄ■化ｓｔｓａｎｄａｎｉｍａｏｃｕａｏｎａｎｄｉｒｃｉｎｅｂｒａｓｓｕｅｓｔｏｔＰＫ１５ｌｄｔｂｙＰＧＲｌｉｎｌｔｉ，ｐ，－－－ａ－ｒｅｓｅｃｉｅｎａｍｅｄＰＲＶＸｉａｎｇＡ、