人乳头瘤病毒16型e6e7基因对原代子宫颈上皮细胞的作用

《人乳头瘤病毒16型e6e7基因对原代子宫颈上皮细胞的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。．j毒r：。。。、；一‘。、：i‘一一、?研究生签名：对弓导师签章：【、y智二级学院领导誊睾：。Ij』．。叠叠伽l簿i乡：翔2．耜．、‘7．+≯河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下

2、进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：是f寺导师獐p≯苗沁『】年多月21日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文人乳头瘤病毒16型E6E7基因对原代子宫颈上皮细胞的作用前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、芍材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·20附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·-21附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·26结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··30综述HPV与EMT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯"

4、32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··44中文摘要人乳头瘤病毒16型E6E7基因对原代子宫颈上皮细胞的作用摘要目的：子宫颈癌是全球发病率位居第二的女性恶性肿瘤，仅次于乳腺癌。高危型人乳头瘤病毒(mV)感染已被确定是子宫颈癌的致病因素，尤以HPVl6和18型最常见，其中E6和E7基因是HPV主要的癌基因。上皮一间质转化(EMT)在肿瘤发生发展和侵袭、转移过程中扮演重要角色，使肿瘤细胞具有高侵袭性和抗药性特征，wnt／t3．catenin和TGF．B

5、／Smad信号通路是EMT发生过程中重要的信号转导通路，有关HPV与子宫颈上皮细胞发生EMT之间的关系尚缺乏研究，其具体信号通路尚未阐明，本研究欲了解HPVl6E6E7基因对子宫颈上皮细胞EMT的作用及信号转导分子的变化，旨在探讨HPVl6E6E7基因与子宫颈上皮细胞发生EMT的关系和可能的信号转导机制。方法：1取2012年8月到2013年3月期间在河北医科大学第二医院，因子宫肌瘤或子宫腺肌症行子宫切除患者的宫颈标本进行原代培养，培养人宫颈上皮细胞，年龄<65岁，术前TCT检查除外宫颈病变，HPV检测结果为阴性，术后病理显示宫颈无异常或有慢性宫颈炎。2采用阳

6、离子脂质体法将HPVl6E6E7转染正常宫颈原代细胞，观察转染前后细胞形态学变化，并通过实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测转染前后细胞中E．cadherin、N—cadherin、[3-catenin、wntl、Smad4及TGF．[31在转录水平的变化。结果：1影响细胞原代培养的因素采用消化法培养的原代细胞，取材65例，培养成功45例，成功率达69％，分析影响细胞培养能否成功的因素包括：患者年龄<60岁者，培养成功率高于>60岁者；取材处组织未被器械损伤者培养成功率超过有损伤者；术中子宫离体时间15分钟内进行取材成活率较高；术前体格检查未发现宫颈或阴

7、道炎症，TCT提示正常或轻度炎症者培养成功率高于有阴道炎或重度宫颈炎症者；dispaseII消化时间随着季节变化而变化，一般在中文摘要20小时左右；K．SFM培养基较DMEM或1640培养基更适合于宫颈上皮细胞原代培养。2正常宫颈原代上皮细胞转染HPVl6E6E7前后细胞形态学的变化经免疫细胞化学染色可见，原代培养的正常宫颈上皮中，间质细胞标志波形蛋白染色阴性，而上皮细胞标志E．钙粘蛋白染色阳性，可证明培养的为宫颈上皮细胞。转染前后倒置显微镜下观察细胞形态均为多边形，胞浆均丰富，与转染前相比较形态上未发现明显变化。3转染前后HPVl6E6、E7和EMT相关基

8、因N．cadherin、E．cadherin、13-