乙型肝炎病毒多聚酶蛋白拮抗ⅰ型干扰素通路的机制研究

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1、万方数据专业病原生物学复旦大学博士研究生学位论文乙型肝炎病毒多聚酶蛋白拮抗I型干扰素通路的机制研究MechanismsofHepatitisBVirusPolymerase—MediatedAntagonizationofTypeIIFNsignaling博士研究生陈捷亮导师袁正宏研究员导师组成员谢幼华研究员陆蒙吉教授二零一三年三月复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部／卫生部重点实验室本课题承国家科技重大专项课题(2008ZXl0203，2012ZXl0002007)、国家重大科学研究计划(2012cB519000)、国家自然科学青年基金(309

2、00062)和中德合作基金(SFB／TransregioTRR60)资助万方数据目录l

3、IlllllllllllllllJU／IIllllllIIIIIIIlY2700478中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3正文乙肝病毒多聚酶蛋白拮抗I型干扰素效应通路的机制研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。26讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．z13结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49论文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56创新点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。57文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58附录1乙肝病毒对肝细胞I型干扰素诱生的影响及

5、机制研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7l附录2⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯100j巍谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯104万方数据博士学位论文中文摘要乙型肝炎病毒多聚酶蛋白拮抗I型干扰素通路的机制研究博士生：陈捷亮导师：袁正宏乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)是一种严重危害人类健康的病原体，可导致急慢性乙型肝炎、肝硬化，并与肝细胞癌的发生密切相关。目前临床上尚无特异性根治慢性乙肝的手段，一般采用核苷类药物及Ⅱ干扰素(interferon，IFN)来抑制

6、HBV复制以最大程度减轻和延缓HBV慢性感染所导致的肝脏免疫病理损伤。其中IFN．Ⅱ作为具有直接抗病毒效应和免疫调节作用的细胞因子是宿主抗病毒天然免疫应答的重要组成部分，其在体内由宿主模式识别受体(PatternRecognitionReceptor，PRR)介导的通路诱生，并经由I型干扰素效应通路发挥抗病毒和免疫调节作用。虽然大量体内外研究已证实IFN．Q具有抑制HBV转录复制的作用，但是临床上慢性HBV感染患者对IFN．a治疗的应答率仅约30％，提示HBV可能存在拮抗I型干扰素效应通路的策略。本课题组前期工作表明HBV编码的多聚酶蛋白(poly

7、merase，PoD具有抑制IFN一(It诱导的MyD88转录的功能。本研究旨在进一步明确Pol在HBV拮抗IFN．0【效应过程中的角色，在此基础上深入观察Pol对IFN．a激活的JAK—STAT(signaltransducerandactivatoroftranscription)通路的抑制作用，并揭示其中分子机制，以加深人们对HBV拮抗I型干扰素通路及逃逸宿主抗病毒天然免疫应答机制的认识。首先在HBV复制和Pol过表达的细胞中采用荧光报告基因检测和实时荧光定量PCR确认了HBV和Pol对于IFN．0【诱导的干扰素刺激反应元件(ISRE)活化及

8、下游抗病毒基因转录的抑制作用。同时在基于高压尾静脉质粒注射的小鼠转染模型中也观察到，HBV和Pol的表达抑制了lIlIFN．a诱导的小鼠干扰素刺激基因(ISGs)的转录。为从生物学意义上确认HBV和Pol的表达削弱了IFN-a介导的抗病毒天然免疫应答，将VSV用作感染指示病毒行病毒保护实验，免疫荧光观察及细胞培养上清病毒滴定的结果均显示，HBV和Pol的存在显著削弱了IFN．0【诱导的细胞抗VSV感染的能力。以siRNA干扰HBV复制细胞中Pol的表达后，HBV拮抗ISRE活化的能力明显减弱，确认了Pol在HBV抑制IFN．0【效应过程中的重要角色

9、。】万方数据博士学位论文中文摘要为进一步探寻Pol对I型干扰素介导的信号转导的影响，通过免疫印迹及免疫荧光观察了Pol对信