IL-33在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用和机制.pdf

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1、分类号：R737.9密级：公开学校代码：11065学号：y0114130094专业博士学位论文IL-33在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用和机制作者姓名胡海燕指导教师王海波（教授）专业领域外科学（普外）培养单位医学部临床医学系答辩日期2018年5月15日IL-33在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用和机制摘要目的：1、本研究通过检测乳腺癌患者血清中IL-33的表达水平，探讨IL-33与乳腺癌临床病理特征与复发之间的关系；2、通过体外实验和体内实验，研究IL-33与乳腺癌内分泌耐药之间的关系；3、分析IL-3

2、3与乳腺癌细胞的干细胞样性能之间的关系，探索IL-33在乳腺癌患者内分泌耐药中的作用和可能机制；4、探寻IL-33促进肿瘤生长、内分泌耐药的重要信号因子；5、分析临床乳腺癌患者内分泌耐药发生与乳腺癌组织中IL-33表达之间的关系。方法：1、采用ELISA法检测30例乳腺癌患者及15例健康志愿者的血清IL-33水平，将30例乳腺癌患者依据临床分期、复发风险分别进行分组比较；检测25例乳腺癌复发患者、20例未复发患者血清IL-33水平；2、通过体外和体内试验检测乳腺癌细胞对他莫昔芬治疗的敏感性。体外实

3、验：应用IL-33过表达载体或者IL-33shRNA载体转染MCF-7细胞系，相应的空白转染为对照，48小时后流式细胞术分析各组IL-33蛋白表达；应用4-羟他莫昔芬（4-hydroxytamoxifen，OHT）处理细胞，MTT法检测IL-33过表达或下调的MCF-7细胞72小时的生长状态，以确定IL-33表达水平是否影响乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性。体内实验：将IL-33过表达或下调的MCF-7细胞种植到BALB/c裸鼠体内，口服管饲法每天施用他莫昔芬（60mg/kg）或PBS对照的治疗，检测

4、移植瘤的生长情况，使用数字卡尺测量肿瘤大小，以确定调控IL-33表达水平是否可作用于移植瘤对他莫昔芬治疗的敏感性；3、将IL-33过表达或下调的MCF-7细胞进行微球体（Mammosphere，MS）培养，计算微球体形成率（Mammosphereformingefficiency，MFE），并与相应的空白转染对照细胞培养的微球体进行比较；将IL-33过表达或下调的MCF-7细胞种植到BALB/c裸鼠体内，通过监测肿瘤成瘤率和生长情况分析IL-33对乳腺癌干细胞样分化的可能作用；采用real-tim

5、ePCR法检测当IL-33过表达或者下调后MCF-7细胞中乙醛脱氢酶1抗体3（Aldehydedehydrogenase1antibody3，ALDH1A3）和雌激素受体（Estrogenreceptor，ER）的mRNA的表达情况，并进行比较；4、通过应用核因子-κB（Nuclearfactorkappa-light-chain-enhancerofactivatedBcells，NF-κB）抑制剂，分析IL-33过表达的MCF-7细胞中微球体形成、ALDH1A3I表达、ER表达情况；在存在或者

6、缺乏NF-kB抑制剂的情况下，分析IL-33过表达的乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性；5、为评价临床患者体内IL-33在乳腺癌患者内分泌治疗耐药中的可能作用，我们取28例新鲜乳腺癌组织检测IL-33的表达水平，并分离上述组织的肿瘤细胞，检测其对他莫昔芬治疗的敏感性。采用流式细胞术检测6例内分泌耐药患者和22例不耐药患者的乳腺癌组织中IL-33的表达，绘散点图进行比较；6、采用real-timePCR法检测22例患者乳腺癌组织中IL-33、ALDH1A3和ER的mRNA表达情况。绘制散点图分别比较IL-

7、33mRNA的表达与ALDH1A3mRNA、ERmRNA表达以及他莫昔芬耐药的相关性。结果：1、乳腺癌患者（n=30）血清IL-33的表达水平为109.4±7.375pg/ml，要明显高于同年龄的健康对照人群（n=15）的表达50.20±4.559pg/ml（P<0.01）。同时，乳腺癌患者中血清IL-33的异常高水平表达与患者肿瘤临床分期和肿瘤细胞分化程度密切相关，提示患者处于乳腺癌晚期并且肿瘤细胞分化程度差。2、我们检测了他莫昔芬治疗过程中乳腺癌复发患者和未复发患者体内的IL-33水平，以明确

8、IL-33在乳腺癌内分泌治疗耐药过程中的作用；结果示，血清IL-33在乳腺癌复发患者（n=25）的表达水平为147.2±9.084pg/ml，要明显高于未复发患者（n=20）的表述水平68.27±4.130pg/m（lP<0.01），表明乳腺癌复发患者的血清IL-33高水平表达。3、我们进一步分析血清IL-33水平与肿瘤复发时间（DFS）之间的关系，结果示血清IL-33较高的患者无瘤生存时间较短，两者之间呈负相关（r=-0.588，P=0.002）。4、MTT法检测IL-33过表达