探讨gper1在乳腺癌三苯氧胺耐药中的作用与机制

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1、重庆医科大学硕士学位论文探讨GPER1在乳腺癌三苯氧胺耐药中的作用与机制姓名：莫志强申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：杨光伦201205重庆医科大学硬士研究生学位论文探讨GPERl在乳腺癌三苯氧胺耐药中的作用与机制摘要目的诱导人乳腺癌MCF一7细胞三苯氧胺(Tamoxifen，TAM)耐药亚型，并构建其动物模型，从GPERl探讨乳腺癌TAM内分泌治疗耐药的机制。方法采用高浓度TAM代谢产物4一羟基他莫昔芬(4_hydroxytamoxifen，4一OHT)短时间冲击法‘¨，诱导入乳腺癌MCF一7／TAM耐药细胞亚型，并通过细胞形态学观

2、察、生长曲线绘制、药物毒性试验、细胞周期比较、Western-blot评价其耐药性。诱导出稳定的MCF一7／TAM耐药亚型后，使用药敏感性试验、Western-blot、RT—PCR和细胞凋亡检测试验研究GPERl在乳腺癌继发TAM耐药过程中的作用；同时构建TAM耐药动物模型，通过观察肿瘤体积变化探讨GPERl在乳腺癌继发TAM耐药后的作用。结果高浓度短时间冲击法n。成功诱导出人乳腺癌McF一7／TAM耐药细胞亚型。与MCF．7细胞相比，E2、G1和4—0HT的促MCF一7／TAM耐药细胞生长增殖效应更显著；耐药细胞内不仅Erkl／2信号通

3、路异常活化，并且靶向阻滞GPERl后Erkl／2活性显著减弱：尽管GPERI总表达量没有变化，但是其在耐药细胞膜上表达上调；拮抗GPERl不仅能够促进耐药细胞的凋亡，而且能够恢复耐药肿瘤对TAM的敏感性。3重庆医科大学硕士研究生学位论文结论GPERl在乳腺癌TAM耐药中发挥重要作用。关键词乳腺癌，三苯氧胺，耐药4ADISCUSSIoNoNTHERoLEoFGPERlINTHEMECHANISMSoFTAMoXIFENRESISTANCEINBREASTCANCERABSTRACTobjectiveTbelucidatemer01eofGPE

4、RliIlmemechaIlismsofresistancetot锄。虹f醯(TAM)eIldo谢nemerapyinbreastcallcer'廿lehumanbreaStcancerMCF-7t锄oxi矗m-resistallcecellsandxenograRswereestablished．MethodsMCF-7TAM-resist锄tcelllinewasderiVedbyclonalselectioniIl11ighconcerl仃ationof4-hydroxyt锄oxifen(4-0HT)forashortp嘶od【I】．

5、DmgtoleranceofMCF．7TAM．resistantCellswerechauraCt甜zedbyinVestigadngcellsmo印hology'cellulargrowthcurve，d11lgtoxicitytests，cellcycle锄dW

6、estemblot．ARerinducedastableMCF-7TAM—resistalltsubline，dmgresponsetests，West锄blot，R小PCRandFCMwereusedtOdetectedtlleroleofGPERlindeVelopment

7、ofTAMresistanceiIlbreastc肌Cer．Meanwllilexeno伊aRsmodelwasestablished，meroleofGPERliIlresistaIltxeno伊aRswasinVestigatedbymeasunngtumorVolume．ResuItsMCF一71'AM—resistantsubline，whichwasd甜Vedbyclonalselectioninhighconcen仃ationofOHTf．0rashortperiod【11，showedsignificantresist锄cet

8、oTAM．ComparedtoMCF-7parentalcells，E2、G15and4-OHTinducedastrongerceUproli矗玎ationofMCF一7／TAM-Rcells；tlleac缸V时ofErk1／2wasenhancedwhiChcouldbereducedbyiIlllibitingGPERlinMCF一7／TAM-Rcells；theexpressionofGPERlinceUsurf．aCewasincreased，whereasitstotalexpressionwasnotchanged；block

9、adeofGPERlwasnotonlyincreasedtlleapoptosisofd11lgresistantcells，butalsorestoredtherespons