溃疡性结肠炎中NHERF4_SLC26A3的动态表达.pdf

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1、分类号：R574.6密级：学号：2015202105单位代码：10759石河子大学硕士学位论文溃疡性结肠炎中NHERF4/SLC26A3的动态表达学位申请人杨奉天指导教师徐丽红申请学位类别医学硕士学科、专业名称内科学研究领域消化系统疾病所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年5月DynamicexpressionofNHERF4/SLC26A3intheintestinalmucosalepitheliumofulcerativecolitisADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmen

2、toftheRequirementsFortheDegreeofMasterofMedicineByYangFengtian(InternalMedicine)Supervisor:XuLihongMay，2018中文摘要目的：通过观察钠氢转运体调节因子4(NHERF4)和溶质载体26A3(SLC26A3)在溃疡性结肠炎(UC)及腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者、健康正常人直肠/乙状结肠黏膜的表达差异，并观察分析其在恶唑酮(OXZ)结肠炎动物模型远端结肠中的动态表达，初步评估NHERF4/SLC26A3是否参与UC的发生发展。方法：1、SLC26A3、NHER

3、F4在IBS-D及UC患者肠黏膜中的表达：UC的诊断参照《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)》中的UC诊断标准,IBS-D诊断参照《功能性胃肠病罗马VI标准》中的IBS-D诊断标准。依据改良Mayo评分评判UC的病情严重程度，依据肠易激综合症严重度评分（IBS-SS）评判IBS-D患者的病情严重程度。以轻-中度UC和IBS-D患者为观察对象。以性别、民族为匹配条件招募正常健康人作为正常对照组。所有入组研究对象均完成电子肠镜检查及病理组织学检查以明确诊断，同时获取直肠/乙状结肠黏膜组织。应用免疫组织化学方法观察SLC26A3与NHERF4的定位表达，

4、Western-blot法观察肠黏膜SLC26A3、NHERF4半定量表达。2、小鼠结肠炎模型的建立与评价：以C57BL/6J小鼠为实验动物，选择OXZ法建立小鼠结肠炎模型，通过观察小鼠体重、肠道出血情况、粪便含水量，采用结肠炎疾病活动指数（DAI）评判小鼠疾病严重程度，通过结肠大体组织验证评分(ButznerJD标准)评判小鼠远端结肠组织损伤。病理组织学方法观察小鼠肠黏膜的炎症损伤情况。3、小鼠结肠炎模型中NHERF4/SLC26A3动态表达规律的体内实验研究：称取C57BL/6J小鼠体重并按体重轻重排序，采用随机数表法分为模型组、正常对照组，分组后按体重重新排

5、序，采用随机数表法，以6、8、10、14天为时间点，将模型组与正常对照组再次分为四个时间点亚组。采用结肠炎疾病活动指数（DAI）评判小鼠疾病严重程度，免疫组织化学方法观察SLC26A3与NHERF4的黏膜定位表达，Western-blot法观察肠黏膜中SLC26A3、NHERF4半定量表达。结果：1、SLC26A3、NHERF4在IBS-D及UC患者肠黏膜中的表达：观察SLC26A3与NHERF4的定位表达，免疫组化结果显示，正常对照的SLC26A3在肠上皮细胞膜及胞浆内均有表达，UC组及IBS-D组SLC26A3主要表达在肠黏膜上皮细胞的胞浆内，与正常对照组的S

6、LC26A3表达部位具有差异性；NHERF4在各组肠黏膜主要表达在胞浆内。Westernblot结果显示，与正常对照组相比，IBS-D组和UC组的SLC26A3蛋白表达降低，NHERF4蛋白表达增高。2、小鼠结肠炎模型的建立与评价：C57BL/6J小鼠OXZ诱导的肠炎模型试验中，模型组的的炎症性肠病症状、病理组织学改变、疾病发展趋势均与人炎症性肠病的临床症状和大体组织学、病理组织学改变相似。3、小鼠结肠炎模型中NHERF4/SLC26A3动态表达规律研究的体内实验：观察SLC26A3、NHERF4在小鼠OXZ肠炎模型中的表达变化，免疫组化结果显示，正常对照组SLC

7、26A3在上皮细I胞膜及细胞浆中均有表达，而模型组SLC26A3表达主要在胞浆内，与正常对照组SLC26A3的表达部位具有差异性；模型组与正常对照组的NHERF4均以肠上皮细胞的细胞浆中表达为主。Westernblot结果显示，模型组SLC26A3蛋白表达高于正常对照组；模型组各时间点SLC26A3蛋白表达量为先降低后增高，其表达降低以第8、10天最为显著；模型组NHERF4的表达低于正常对照组，各时间点NHERF4蛋白表达量为先升高后降低，其表达增高以第8天最为显著。结论：1、本研究首次证实，在轻中度UC中存在NHERF4表达增高。2、UC动物模型中NHERF4

8、/SLC2