活性维生素D3对阿霉素肾病大鼠足细胞的作用.pdf

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1、分类号：密级：公开学号：2015200555单位代码：10759石河子大学硕士学位论文活性维生素D3对阿霉素肾病大鼠足细胞的作用学位申请人刘馨馨指导教师罗星申请学位门类级别理学硕士学科、专业名称生物化学与分子生物学研究方向蛋白质功能与疾病所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年06月TheEffectofActiveVitaminD3onPodocyteinAdriamycin-inducedNephropathyRatsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDe

2、greeofMasterofNaturalScienceByLiuXinxin(BiochemistryandMolecularBiology)DissertationSupervisor:LuoXingJune,2018石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，

3、学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的：检测活性维生素D3[1,25-(OH)2D3]对阿霉素(adriamyicin,ADR)肾病病理改变的修复作用，分析足细胞的损伤程度与nephrin、CD2AP、podocin以及p-AKT，在不同时间点，大鼠体内蛋白水平变化以及彼此之间的相关关系，明确活性维生素D3对阿霉素肾病大鼠足细胞损伤的影响。

4、方法：1.制备阿霉素大鼠肾病动物模型：6周龄雄性SD大鼠随机分为三组，正常对照组(control)，阿霉素肾病模型组(ADR)和维生素D3治疗组[ADR＋1,25-(OH)2D3]。采用一次性尾静脉注射阿霉素溶液的方法制备阿霉素大鼠肾病动物模型，注射阿霉素一周后，代谢笼收集24h尿液测24h尿蛋白定量。2.活性维生素D3治疗：治疗组按0.25ug/kg的剂量每天给予活性维生素D3灌胃，对照组和模型组每天给予等量花生油灌胃。3.体重、血、尿生化指标检测：每周称量大鼠体重。于注射阿霉素后第2、4、6、8、10周末处死大鼠，采血、取肾并称肾重。处死前一天用代谢笼收集大鼠24h尿液，采用全自动生化分析

5、仪检测大鼠血液、尿液标本（24h尿蛋白定量，血清总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮、胆固醇）。4.肾组织病理检查：HE、Masson染色后光镜观察肾小球的硬化、细胞增生、细胞肥大和细胞凋亡。透射电镜观察足细胞足突有无消失、融合，胞体内有无异常颗粒等，有无凋亡细胞的染色质浓缩、核染色质靠边现象以及凋亡小体等。5.免疫组化观察足细胞损伤程度，nephrin、CD2AP、podocin以及p-AKT蛋白表达定位及分布。6.实时荧光定量PCR检测nephrin、CD2AP、podocin以及AKT在mRNA水平的表达变化。7.WesternBlot检测nephrin、CD2AP、podocin以及p-AKT

6、在蛋白水平的表达变化。结果：1.成功制备阿霉素大鼠肾病动物模型：与对照组相比，阿霉素模型组大鼠干预一周后体重相对较轻（P<0.05），且24h尿蛋白定量显著高于正常水平（P<0.05）。2.阿霉素肾病大鼠血清胆固醇、肌酐、尿素氮较同时期对照组明显升高（P<0.05），血清白蛋白，总蛋白明显降低，差异显著（P<0.05）；与模型组大鼠比较，治疗组治疗至第6周末时，各个指标明显改善，差异有统计学意义（P<0.05）。3.肾组织病理学结果显示：对照组大鼠肾外观呈红褐色，触之平滑柔软；模型组呈苍白色，被膜紧张；与模型组比较，治疗组上述病理学改变均有好转，质地红润，水肿程度减轻。大鼠肾组织HE、Mass

7、on染色显示，对照组大鼠肾小球形态结构正常；模型组肾小球上皮细胞空泡样变性，胞外基质增生，出现节段性硬化；治疗组上述病理变化不明显。透射电镜观察结果显示，对照组大鼠足细胞形态结构正常，足突I清晰完整；模型组大鼠足细胞变扁平，足突广泛融合，部分区域可见足突从基底膜脱落；与模型组比较，治疗组上述病变有不同程度减轻，可见足突融合轻微，基底膜无明显增厚。4.免疫组化结果显示：nephrin、podocin