活性维生素d3对uuo模型大鼠肾间质单核巨噬细胞抑制作用的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文活性维生素D3对UUO模型大鼠肾间质单核巨噬细胞抑制作用的研究姓名：曹伟科申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：王京明；孙亦201203中文摘要活性维生素D3对UUO模型大鼠肾间质单核巨噬细胞抑制作用的研究摘要目的：选用大鼠单侧输尿管梗阻(unilateralureteralobstruction，troo)．肾间质纤维化模型，观察l，25．(O田2D3对肾组织中单核巨噬细胞(ED一1阳性细胞)浸润、单核细胞趋化蛋白．1(MCP．1)、基质金属蛋白酶．9(MMP．9)，基质金属蛋白酶抑制剂．I(TIMP．1)基因和蛋白水平表达及血清TNF．Ct水平的影响，从单核

2、巨噬细胞角度探讨活性维生素D3在肾间质纤维化中的保护作用和可能机制。方法：1实验动物分组将50只清洁级雄性SD大鼠，随机分为五组(每组10只)：①UUo+1，2S(OH)2D3高剂量治疗组；②trUO+l，2S(OH)2D3低剂量治疗组；③troo+贝那普利阳性对照组；④troo空白对照组；⑤假手术组。给药方法：术后第一天给药，每天给药1次，UUO+I，25(OH)2D3高、低剂量治疗组分别按6n∥lOOg体重、3ng／1009体重给药，将骨化三醇溶于橄榄油，lml灌胃／次，同时给予lml生理盐水灌胃；UUO+贝那普利阳性对照组给予盐酸贝那普利片0．17mg／1009溶于生理盐水l“灌胃

3、，同时给予lml橄榄油灌胃；UUO空白对照组仅行左侧输尿管结扎术，UUO空白对照组与假手术组均给予lml橄榄油和lml生理盐水灌胃。于术后第28天处死大鼠，取血清和左侧肾脏留做标本。2观察、检测指标2．1观察1,25(OH)2D对模型大鼠肾间质纤维化病理影响：①肉眼观察肾脏大体病理变化；②天狼猩红染色观察肾间质纤维化病理变化。2．2采用免疫组化法观察梗阻侧肾脏单核巨噬细胞浸润情况。2．3血清中TNF．Cl水平检测：腹主动脉取血，分离血清，采用ELISA法检测。2．4RT-PCR和Westernblot法检测MCP．1、M／rIP．9、TIMP．1mRNA和蛋白表达水平的变化。数据资料用(

4、z士SD)表示。中文摘要结果：l实验大鼠肾组织中胶原沉积(CVF)的情况假手术组大鼠肾间质中可见少量胶原沉积，UUO空白对照组肾间质中胶原沉积明显增多，其CVF值与假手术组相比，差异有统计学意义(P0．05)。2各实验组大鼠肾脏单核巨噬细胞(ED．1阳性细胞)浸润情况假手术组大鼠肾组织间质中偶见ED．1阳性细胞；UUO空白对照组肾间质中ED．1阳性细胞数明显高

5、于假手术组(尸O．05)。3各实验组大鼠血清TNF．Q水平的变化UUO空白对照组术后大鼠血清中TNF．a浓度水平，较假手术组有明显增高(尸

6、浓度水平无统计学差异(尸>O．05)。4各实验组大鼠肾脏MCP．1、MMP．9、TIMP．1mRNA水平的表达4．1MCP．1、TIMP．1：UUO空白对照组MCP．1、TIMP．1mRNA的表达呈高表达，与假手术组比较，差异具有统计学意义(P<0．05)，UUO+I，25(OI-1312D3治疗组及I兀肼贝那普利阳性对照组MCP．1、TIMP．1mRNA的表达明显被抑制，与UUO空白对照组相比，具有统计学意义(P

7、假手术组MMP．9mRNA的表达，与UUO空白对照组相比，差异有统计学意义(PO．05)。5各实验组大鼠肾脏MCP．1、MMP．9、TIMP．1蛋白水平的表达5．1MCP．1、TIMP．1：UUO空白对照组大