交感α1-AR对大鼠心肌细胞NPs表达的影响及机制研究.pdf

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1、分类号：R541密级：公开学号：2015202108单位代码：10759石河子大学硕士学位论文交感α1-AR对大鼠心肌细胞NPs表达的影响及机制研究学位申请人罗瑞娣指导教师王忠教授申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称内科学研究方向高血压及冠心病的发病机制与防治研究所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年6月Effectsofα1-adrenergicreceptorsontheexpressionofNPsinneonatalratcardiacmyocytesanditsmechanismADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartial

2、FulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineBy(internalmedicine)DissertationSupervisor:Prof.WangZhongJune，2018交感α1-AR对大鼠心肌细胞NPs表达的影响及机制研究摘要（Abstruct）目的：通过研究α1肾上腺素能受体（α1-AR）对大鼠心肌细胞NPs（Natriureticpeptides，钠尿肽）合成及CaN-NFATc3、MEK3-P38相关信号通路中相关因子变化的影响，探讨α1肾上腺素能受体与NPs合成的相互作用及其调控机制。方法：体外分离培养SD

3、大鼠乳鼠心肌细胞（CMs），进行离体细胞实验。（一）观察不同剂量α1受体激动剂苯肾上腺素（Phenylephrine，PE）对心肌细胞proANP（前体ANP）、proBNP（前体BNP）及p-P38（活性p38丝裂原活化蛋白激酶）、钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）蛋白表达的影响及信号分子NFATc3（T细胞转录活化因子3）、MEK3（MAP2K3，丝裂原活化蛋白激酶）的变化，离体培养大鼠原代心肌细胞，细胞培养72h后分为4组进行实验：空白对照组、10µmol/L苯肾上腺素组、25µmol/L苯肾上腺素组、50µmol/L苯肾上腺素组，免疫印迹法（WesternBlot）定量测

4、定在各组细胞中proANP、proBNP、CaN及磷酸化p38蛋白的含量,用酶联免疫吸附法（Elisa法）测定各组细胞NFATc3、MEK3蛋白浓度；（二）利用α1-AR、CaN、p38阻滞剂分别预处理离体培养的心肌细胞，分为7组进行实验：空白对照组、PE组、α1-AR阻滞剂哌唑嗪(prazosine)预处理组、CaN抑制剂环孢素(CsA)预处理组，p38MAPK抑制剂SB203580预处理组，以及CsA、SB203580单独作用组。药物处理后，镜下观察心肌细胞状态，并运用台盼蓝计数及MTT法测定各组CMs增殖，比色法测定干预后的各组心肌细胞活力；低温裂解细胞提取细胞蛋白，在PE组、哌唑嗪预处

5、理+PE组、CsA预处理+PE组、SB203580预处理+PE组5组中运用免疫印迹法定量测定proANP、proBNP、CaN及p-p38MAPK蛋白在各组细胞中的表达；以ELISA法测定各组细胞NFATc3、MEK3蛋白含量。结果：（1）不同浓度α1-AR激动剂苯肾上腺素可呈剂量依赖性诱导离体心肌细胞合成proANP、proBNP、p-P38、CaN蛋白，NFATc3、MEK3信号分子含量也随苯肾上腺素含量的升高而升高，相较于空白对照、PE10、PE25组，PE50组各蛋白含量明显升高（p<0.05）；（2）α1-AR、CaN、P38阻滞剂处理后各组细胞发生不同程度的形态学改变；（3）适宜浓

6、度的PE可提升心肌细胞相对活力，而CsA、SB203580的加入可抑制这种作用；CsA、SB203580单独作用于心肌细胞可部分降低心肌细胞相对活力（p<0.05，p<0.05）；（4）α1-AR活化可促进心肌细胞表达ANP、BNP（p<0.05，p<0.05），α1-AR抑制后部分阻断了ANP、BNP的合成(p<0.05，p<0.05）；（5）CsA、SB203580使用后，PE对心肌细胞中ANP、BNP的诱导表达下降（p<0.05，p<0.05）；（6）prazosine、CsA、SB203580分别阻断α1-AR、CaN、P38相关信号转导后，心肌细胞中NFATc3、MEK3信号分子的含

7、量均有不同程度降低（p<0.05，p<0.05）。结论：（1）苯肾上腺素可呈剂量依赖性诱导离体心肌细胞中有关ANP、BNP合成的信号通路激活；以50µmol/L为较佳剂量；（2）CaN、NFATc3及MEK3、P38信号分子相关通路参与α1-肾上腺素能受体介导的心肌细胞内分泌激素（ANP、BNP）的表达。关键词：α1-AR；心房钠尿肽（ANP）；脑钠肽（BNP）；钙调神经磷酸酶（CaN）；丝裂原活