低浓度oua对大鼠心肌细胞收缩力的影响及机制研究

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1、河北医科大学硕士学位论文低浓度OUA对大鼠心肌细胞收缩力的影响及机制研究姓名：周晓辉申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：王永利201203中文摘要低浓度OUA对大鼠心肌细胞收缩力的影响及机制研究摘要心力衰竭是多数心血管病的最终归宿和主要死因。其症状复杂，预后严峻，是当今心血管疾病治疗中的一大难题，严重危害公共健康。强心苷(Cardiotonicsteroid，Cs)是治疗心衰的传统经典药物，研究证明其治疗心衰的作用机制与钠钾泵(Na+／K+．ATPase，Na／Kpump，NKA，钠泵)活性有

2、关。钠钾泵是普遍存在于人类和动物细胞膜上的一种酶，其0【亚基上存在强心苷的结合位点。目前认为强心苷治疗心衰的机制在于抑制心肌细胞膜上的钠钾泵，使细胞P勺Na+增加，通过Na+／Ca2+交换，引起胞浆Ca2+的升高，并促进肌浆网对钙的摄取及随后的钙释放(CICR)，从而使心肌细胞的收缩力增强。但研究也发现，临床上强心苷有效治疗心衰的血清游离药物浓度(10-910培M)比其抑制钠钾泵发挥离子转运功能的浓度要低得多，而且Gao等指出，低浓度强心苷(10-910。8M的双氢哇巴因)不但不抑制反而会兴奋钠钾

3、泵。我室以往的实验也证实低浓度强心苷(10-10_10喝M的双氢哇巴因)能够产生兴奋性钠钾泵电流。这使得传统的钠钾泵抑制理论难以圆满解释治疗浓度强心苷的强心作用。因而，我们提出了低浓度强心苷可能通过直接兴奋钠钾泵而强心治疗心衰的假设，并首次在离体灌流豚鼠心脏发现nM为强心苷的治疗浓度，具有浓度依赖性持续强心作用和钠钾泵兴奋作用，且其强心作用与其兴奋钠钾泵作用呈显著正相关，首次为“强心苷兴奋钠钾泵可能为其强心机制"的假说提供了证据。但在分离的左心室内膜心肌细胞上虽也曾偶尔观察到此浓度强心苷的强心作用

4、，却始终未得到稳定的测定结果。心肌细胞收缩舒张功能的测定对于心力衰竭的发生发展极其药物治疗机制的研究起着至关重要的作用。此类实验对细胞质量要求极高，不仅需要细胞能耐受持续刺激，而且要求细胞在一定时间内能维持稳定的收缩舒张功能。有文献报道，温度变化影响心肌细胞的收缩特性。本室以往实验中也发现，细胞的收缩力随着季节交替和温度变化而变化。因此，本实验拟首先以心肌细胞收缩功能为指标，通过连续升温和恒温孵育两种方法中文摘要确定一个能使心肌细胞产生最大且最稳定收缩的最佳温度。并在此温度下测定低浓度(10。8M

5、)OUA对大鼠心室肌细胞的正性肌力作用，观察钠钾泵各信号转导通路抑制剂对低浓度OUA正性肌力作用的影响。一、温度对大鼠心肌细胞收缩力的影响目的：确定一个能使心肌细胞产生最大且最稳定收缩的最佳温度。方法：用酶解法急性分离大鼠左室心肌细胞并覆钙，然后采用可视化单细胞动缘探测系统(Video．basedmotionedge．detectionsystem)同步检测比较连续升温和固定恒温对单个大鼠心肌细胞舒张、收缩功能的影响。结果：1连续升温对心肌细胞收缩力的影响25℃一37℃逐步升温过程中，每个温度刺激

6、下心肌细胞收缩力各不相同。若将25℃时(roomtemperature)大鼠心室肌细胞收缩幅度标准化为100％，则27℃、29℃、30℃、31℃使细胞收缩幅度分别增大至(107．6944-2．042)％(p<0．01)、(127．04-6．3)％(pO．05)、(132．5士25．6)％(p>O．05)、(129．

7、84-33．3)％(p>O．05)，与25℃时相比没有显著性差异。而且，30℃后随着温度的继续上升，细胞会出现不规律收缩，某些细胞还会出现形态改变，甚至挛缩死亡。以上结果提示，在25℃q7℃逐步升温过程中，温度为30℃时心肌细胞可达最佳收缩。2固定恒温对心肌细胞收缩力的影响25℃、30℃、35℃孵育lh后大鼠心室肌细胞收缩幅度有差异。25℃孵育的细胞收缩幅度为4．544-0．13，30℃孵育的细胞收缩幅度为6．924-0．33，35℃孵育的细胞收缩幅度为2．584-0．22，三组数据两两比较p

8、．01。该结果表明：25℃、30℃、35℃三个温度恒温孵育后的细胞收缩幅度存在显著差异，其中30。C孵育的细胞收缩幅度最大且稳定，为25℃时收缩幅度的152％，此结果与连续升温时测定的结果一致，但增加比例较连续升温至30℃时的增加比例(142％)为大。与连续升温测定结果所不同的是，35℃时细胞收缩幅度最小，仅为25℃时收缩幅度的57％。结论：温度变化影响大鼠心室肌细胞的收缩舒张功能，30℃时细胞收缩力强且稳定，可能与低温升高细胞内钙和提高肌丝对钙的敏感性有关。中文摘要·二、低浓度O