一株产低温β-半乳糖苷酶菌株Microbacterium sp.LW106的筛选鉴定、产酶条件及其酶学特性.pdf

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1、分类号：密级：公开学号：20162111004单位代码：10759石河子大学硕士学位论文一株产低温β-半乳糖苷酶菌株Microbacteriumsp.LW106的筛选鉴定、产酶条件及其酶学特性学位申请人张宇洁指导教师关波倪永清申请学位类别专业学位专业名称食品加工与安全研究领域微生物检测技术所在学院食品学院中国·新疆·石河子2018年6月分类号：密级：公开学号：20162111004单位代码：10759石河子大学硕士学位论文一株产低温β-半乳糖苷酶菌株Microbacteriumsp.LW106的筛选鉴定、产酶条件及其酶学特性

2、学位申请人张宇洁指导教师关波副教授倪永清教授申请学位类别专业硕士专业名称农业硕士研究领域食品加工与安全所在学院食品学院中国·新疆·石河子2018年6月IsolationandidentificationofaMicrobacteriumsp.LW106strainproducingcold-activeβ-galactosidaseanditsenzymaticpropertiesADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequire

3、mentsfortheDegreeofMasterofAgriculturalExtensionByZhangYujie(Foodprocessingandsafetyprofessional)DissertationSupervisor:Prof.GuanBoandNiYongqingJune，2018摘要目的：低温β-半乳糖苷酶在低温下具有较高的活性，在乳品加工中具有应用前景。筛选酶学特性能够满足低乳糖牛乳生产要求的高活性低温β-半乳糖苷酶仍是目前研究的热点。对天山中国一号冰川沉积物中分离的一株产低温β-半乳糖苷酶菌株的

4、产酶条件和酶学特性进行研究。方法：以X-gal平板法初筛、测低温下粗酶液的相对酶活复筛，获得产低温-半乳糖苷酶的菌株。对目标菌株进行16SrRNA基因测序和系统发育分析，单因素实验研究该菌株产低温β-半乳糖苷酶的培养条件，硫酸铵分级沉淀初步纯化β-半乳糖苷酶并对其酶学特性进行分析。结论:1.根据形态观察、生理生化试验、16SrDNA基因序列同源性比对及构建系统发育树对该菌株进行了鉴定。结果显示，该菌株为微杆菌属（Microbacteriumsp.），因此命名为MicrobacteriumLW106。2.该菌株最适产酶温度为2

5、5℃，最佳产酶碳源为可溶性淀粉，培养基初始pH7.0，接种量为3%，装液量为30mL/100mL。在含可溶性淀粉、酵母粉和蛋白胨的培养基中培养42h该菌株生长量达到最大，培养42h胞内β-半乳糖苷酶活力达到最大值，为2.208±0.043U/mL；3.对初步纯化的低温β-半乳糖苷酶酶学性质的研究表明，LW106所产β-半乳糖苷酶的最适pH为6.0，最适反应温度为35℃，4℃下相对酶活为78%，4℃和pH7.0时的稳定性最好，10mmol/L的+2+Na对酶活性基本没有抑制作用，Ca对酶活性具有激活作用，达到对照的139%。菌

6、株LW106所产低温β-半乳糖苷酶具有低温下较好的酶学性能，在乳品低温加工领域具有研究价值。关键词：低温β-半乳糖苷酶；微杆菌；产酶条件；酶学性质IAbstractObjective：Cold-activeβ-galactosidase,whichissuitableforthehydrolysisoflactoseincowmilkatlowtemperature,hasagoodapplicationprospectinthedairyprocessingindustry.Miningnovelcold-activeβ-

7、galactosidasewithhighactivityatlowtemperature,whichcanmeettherequirementoflowlactosemilkproduction,isstillthehotspotofcurrentresearch.Thisstudyisaimingtoscreennovelstrainsproducingcold-activeβ-galactosidasefromglaciersedimentsatChinaNo.1glacierinTianshanMountainsan

8、delucidatethepropertiesofthecold-activeβ-galactosidase.Methods:X-galcontainingplatemethodwasusedforprimaaryscreening,andrelativeβ-galactosidaseac