TGF-β1信号通路调控SYT-SSX1诱导滑膜肉瘤干性特征的初步研究.pdf

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1、分类号：密级：学号：单位代码：10759石河子大学硕士学位论文TGF-β1信号通路调控SYT-SSX1诱导滑膜肉瘤干性特征的初步研究学位申请人刘子涵指导教师齐妍副教授庞丽娟教授申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称病理学与病理生理学研究方向肿瘤病理与分子诊断学研究所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年5月TGF-β1SignalingPathwayRegulatesSYT-SSX1-inducedStemcellfeaturesofSynovialSarcomaADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentofth

2、eRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByLiuZihan(Pathologyandpathophysiology)Supervisor:QiYanMay,2018摘要目的：本研究通过体外实验，初步研究SYT-SSX1融合基因对滑膜肉瘤（synovialsarcoma,SS）球体细胞（sphere）的影响，探讨TGF-β1信号通路调控SYT-SSX1对滑膜肉瘤干细胞样细胞的作用，为进一步研究滑膜肉瘤肿瘤干细胞靶向治疗提供一定理论基础。方法：用SYT-SSX1融合基因慢病毒转染滑膜肉瘤SW982细胞，构建SYT-SSX1高表达细胞系，Onestep

3、RT-PCR检测SYT-SSX1mRNA表达。无血清悬浮方法培养sphere。运用qRT-PCR、Western-Blot、流式细胞仪检测转染前后CSC标记物mRNA及蛋白表达，Transwell实验检测转染前后球细胞的迁移能力。TGF-β1重组剂和抑制剂SB431542处理SYT-SSX1高表达和对照组sphere细胞。运用qRT-PCR、Western-Blot、流式细胞仪检测各组CSC标记物mRNA及蛋白表达，运用正态性检验、t检验等进行统计学分析，P<0.05表示差异有统计学意义。结果：①通过无血清悬浮方法培养后，发现SYT-SSX1型高表达细胞比未处理组细胞成球数目多，体积大，成球率

4、高，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.001），表明SYT-SSX1融合基因能促进滑膜肉瘤sphere的形成。qRT-PCR、Western-Blot和流式细胞仪结果表明：SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性比未处理组sphere细胞强，且差异有统计学意义（P<0.001）。②重组剂TGF-β1处理SYT-SSX1sphere细胞后,发现随着rhTGF-β1浓度升高，SYT-SSX1型高表达sphere细胞数目逐渐增加，单个sphere细胞体积逐渐增大。当rhTGF-β1浓度为10ng/ml，增加最明显，且差异有统计学意义（P<0.001）。qRT-PCR、Western-Blo

5、t和流式细胞仪结果表明：随着rhTGF-β1浓度升高，SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性逐渐增强。当rhTGF-β1浓度为10ng/ml，SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性达到最强，且差异有统计学意义（P<0.01,P<0.001）。③抑制剂SB431542处理SYT-SSX1sphere细胞后,发现随着SB431542浓度升高，SYT-SSX1型高表达sphere细胞数目逐渐减少，单个sphere细胞体积逐渐变小。当SB431542浓度为40UM时，减少最明显，且差异有统计学意义（P<0.01）。qRT-PCR、Western-Blot和流式细胞仪结果表明：随着SB431

6、542浓度升高，SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性逐渐减弱。当SB431542浓度为40UM时，SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性达到最弱，且差异有统计学意义（P<0.01,P<0.001）。结论：1.SYT-SSX1融合基因可能促进滑膜肉瘤sphere细胞的增殖，并且可能增强滑膜肉瘤sphere细胞的干性。2.TGF-β1信号通路可能通过SYT-SSX1融合基因增强滑膜肉瘤干细胞样细胞的干性特征。关键词：滑膜肉瘤；肿瘤干细胞；SYT-SSX1融合基因；TGF-β1IAbstractObjective:Thisstudyaimedtoexploretheinfluenceo

7、fSYT-SSX1fusiongenesforsphereformationinvitro,andtofurtherinvestigatetheroleofTGF-β1signalingpathwayinthestemnessofSYT-SSX1highexpressionspherecellsofsynovialsarcoma.Thisresearchmaythusprovideanewtarg