toll样受体介导的tslp在过敏性结膜炎中的作用和调控机制研究

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1、分类号：R777·3jUDC：617．71III]I]IIIIIIIIItlLIIIIIIILIIIIIIIIIIIIIIIIIILIIY2445107密级：学校代码：11065lIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIWF2814439毒鼻大季博士学位论文Toll样受体介导的TSLP在过敏性结膜炎中的作用和调控机制研究指导教师学科专业名称论史提交日期论吏答辩日期答辩委舞会童蓐张丽丽赵桂秋教授眼科学2013年04月10日2013年05月31日赵堪兴教授Toll样受体介导的TSLP在过敏性结膜炎中的作用

2、和调控机制研究中文摘要目的：探讨Toll样受体TLR)介导的胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其下游信号分子OX40L／OX40在过敏性结膜炎中的作用机制。方法：本研究建立了三种不同类型的过敏模型，据此，实验分以下三部分进行。L垄鲨透昱尥型!基数过煎：睦结膜炎搓型：取野生型BALB／C小鼠，TLR4基因缺陷鼠；基于C57BL／6的Myd881。和Myd88一小鼠；分别在建模第一天给予花粉的全身致敏，在第10～15天进行花粉的局部眼表直接刺激。应用qPCR，免疫组织化学染色，免疫荧光检测小鼠角膜上皮，结

3、膜上皮，颈部致敏淋巴结中TSI，P，其下游相关因子及Th2细胞因子的表达。至：蕉猃透曼的丛!基旦部腿麦!§业透筮撞型：取野生型BALB／C小鼠，TLR4基因缺陷鼠；基于C57BL／6的Myd88+“和Myd88—7一小鼠；直接给予花粉进行眼表的局部刺激，1—24小时。应用qPCR和ELISA检测小鼠的角膜和结膜上皮中TSLP的表达变化。圣：蕉趋透昱盥厶鱼堪上廛细胞!曼业透筮攫型：体外培养人的角膜上皮细胞，分别给予不同浓度的花粉刺激，以及TLR4抗体，NF—Kb—I的预处理，应用qPCR和ELISA检测T

4、SLP的表达变化。结果：1．花粉诱导的小鼠的过敏性结膜炎模型：①在BALB／C小鼠的过敏性结膜炎模型中，qPCR显示：与PBS对照组相比，模型鼠角膜上皮，结膜上皮和颈部致敏淋巴结中TSLP，TSLP下游通路因子(TSLPR，OX40L，OX40，CDl1C，CD4)以及Th2细胞因子(IL-4．1L一5，IL一13)表达增加，而Thl细胞因子IFNy表达量则基本不变。免疫组织化学染色在蛋白水平证实了这～变化。②在BALB／C小鼠和TLR4基因缺陷鼠的过敏模型中，qPCR显示：与BALB／C小鼠过敏模型对

5、照组相比，TIJR4基因缺陷模型鼠角膜上皮，结膜上皮和颈部致敏淋巴结中TSLP，TSLPF游通路因子以及Th2细胞因子表达量降低。对模型鼠眼球的免疫组织化学染色和淋巴结的免疫荧光染色在蛋白水平证实了这一变化。③在Myd88⋯小鼠的过敏性结膜炎模型中，qPCR显示：与Myd88++PBS对照㈣Y：!l

6、『㈣44㈣5㈣10吣7眦组相比，模型鼠角膜上皮，结膜上皮和颈部致敏淋巴结中‘FSLP，TSLP下游通路因子以及Th2细胞冈子表达增加。与Myd88“一过敏模型相比，这些细胞因子的表达也明显高于Myd88—7

7、一小鼠的过敏性模型组。对模型鼠眼球的免疫组织化学染色和淋巴结的免疫荧光染色在蛋白水平证实了这些变化。星：垄扮透昱的型：鼠昼鳌9垦塞!曼!=旦透筮撞型：1)与PBS对照组相比，BALB／C小鼠眼表接受花粉直接刺激后，其角膜上皮和结膜上皮中TSLP表达量增加。给予TLR4抗体的预处理可以抑制花粉对TSLP的刺激作用。TSLP表达量的E1．ISA检测在蛋白水平证实了这些变化。2)与BALB／C小鼠花粉刺激组相比，TLR4基因缺陷刺激组角膜上皮，结膜上皮中TSLP表达量降低。与Myd88+十／J、鼠花粉刺激组相

8、比，Myd88一花粉刺激组角膜上皮，结膜上皮中TSLP表达量也同样是降低的。TSLP表达量的ELISA检测在蛋白水平证实了这些变化。墨：垄塑透曼的△鱼腿土廛细胞!墨业透蕉送型：在体外培养的人角膜上皮细胞中，花粉可以诱导上皮细胞中TSLP表达量增加，并呈现出浓度依赖的变化趋势。给予TLR4抗体或者NF—Kb—I可以抑制花粉对TSLP的刺激作用。TSLP表达量的ELISA检测在蛋白水平证实了这些变化。结论：1．TSLP及其下游通路因子在过敏性结膜炎的发病机制中起重要作用。2．在花粉诱导的过敏性结膜炎巾，外界

9、致敏原可以通过TLR4／Myd88这一信号通路，诱导上皮细胞中TSLP及其相关信号分子的表达，进而诱发Th2炎症反应。3．人为阻断TLR4，Myd88等关键位点，可以抑制花粉诱导的过敏反应，降低TSI。P及相关Th2细胞因子的表达，从而可能成为临床上新的治疗靶点。博士研究生张丽丽(眼科学)指导教师赵桂秋教授关键词：过敏；结膜炎；Toll样受体；胸腺基质淋巴细胞生成素；固有免疫AbstractObjective：Wesoughttoexplo